背景： 转移癌是临床工作中经常遇到的情况，不同类型和不同来源的转移癌具有不同治疗方法和预后。因此，明确转移癌的原发部位(原发灶)对于制订治疗方案具有重要意义。很多年来，人们一直在探寻确定转移癌的有效方法。到目前为止，主要采用的方法包括：查体、检验、影像学、组织病理学。前三种方法很难对肿瘤同时做到准确的定位和定性，组织病理学检查可以确定部分肿瘤的原发部位，但需要手术取活检，这样难免会给患者带来较大的创伤和痛苦。因此，寻找一种可靠方便的诊断途径成为大家广泛关注的问题。针吸细胞学具有简便、易行、痛苦小的特点，免疫细胞化学具有分辨不同细胞来源和分化特点，将这两种方法有效的结合，可能会为探索转移癌的原发灶开辟一片新天地。针吸细胞学及免疫细胞化学结合的诊断能对部分肿瘤进行准确的定位及定性，又避免了活检的缺点。是一种具有潜在广泛应用价值的寻找转移癌原发灶的方法。 研究目的： 1、选取有效的针吸细胞学方法，探索和改进细胞块制作方法； 2、探索和改善免疫细胞化学的方法； 3、研究和探寻器官和组织特异性抗体； 4、研究抗体组合模式在不同组织器官中的表达特点； 5、探讨针吸细胞学及免疫细胞化学联合应用在寻找转移癌原发灶中的可行性。 材料和方法： 1、采用持笔式持续负压穿刺器对2006-2008年北京友谊医院病理科送检的80例手术标本和82例病人体表肿物进行直接穿刺，获取细胞标本，并采用凝血酶凝聚法制备细胞块，经连续切片后进行免疫细胞化学染色。 2、采用了北京友谊医院近十年的肿瘤组织392例，制备成组织芯片，其中肺癌87例(包括：鳞癌35例，腺癌48例，小细胞癌4例)、胃癌72例、直肠癌36例、肾癌75例(包括：透明细胞癌43例，乳头状肾细胞癌23例，嫌色细胞癌9例)、前列腺癌22例、乳腺癌78例(浸润型导管癌59例，浸润型小叶癌7例)、卵巢癌35例。采用CK7、CK20、Villin三种抗体组合模式对组织芯片进行免疫组化染色，观察不同肿瘤的抗体表达特点，并总结规律。 3、对送检的手术标本进行穿刺后制备的细胞块共80例，其中72例有效(包括直肠来源8例，结肠来源23例，移行细胞癌8例，肾透明细胞癌12例，乳腺来源6例，胃来源10例，肺来源5例)。然后进行CK7、CK20、Villin抗体组合及一些组织相关特异性抗体(如TTF-1)的免疫化学染色，了解这些抗体的表达情况和特点，再通过与手术标本的常规组织切片对比，验证抗体表达的特异性和准确性。 4、对病人体表肿物进行直接穿刺后制备的细胞块标本82例，其中58例有效。有相应的组织学诊断或随访。然后进行CK7、CK20、Villin抗体组合及一些组织相关特异性抗体的免疫化学染色，判断肿瘤原发部位。将结果与组织学活检或随访记录进行比较，观察二者的符合程度，从而判断联合应用针吸细胞学及免疫细胞化学对确定肿瘤原发灶是否具有有效性和实用性。 结果： 1、细胞块制备的成功率：在对手术标本和病人体表肿物进行穿刺制备细胞块的过程中，由于标本的细胞量偏少、凝血酶失效，或未穿刺到准确的肿瘤部位，造成部分细胞块制作失败。此两部分细胞块制备的成功率分别为90％(72/80)、80/82(97.56％)。 2、对392例组织芯片进行CK7、CK20、Villin免疫组化染色，根据抗体的表达情况，分成8种模式：①CK7+/CK20+/Villin+，②CK7+/CK20+/Villin—，③CK7+/CK20-/Villin+，④CK7+/CK20-/Villin-，⑤CK7-/CK20+/Villin+，⑥CK7—/CK20+/Villin—，⑦CK7—/CK20—/Villin+，⑧CK7—/CK20—/Villin—。对各肿瘤在8种模式中出现的情况进行分类总结。比如：CK7+/CK20—/Villin+时，细胞的来源可能为胃腺癌、乳头状肾细胞癌、乳腺浸润性导管癌、卵巢浆液性腺癌。而来源于肺鳞癌、肺小细胞癌、肾透明细胞癌、肾嫌色细胞癌、前列腺癌、直肠腺癌、乳线浸润性小叶癌、卵巢粘液性癌的可能性较小。 3、对送检的手术标本进行穿刺制备的细胞块共72例，其中直肠来源8例，结肠来源23例，移行细胞癌8例，肾透明细胞癌12例，乳腺来源6例，胃来源10例，肺来源5例。对CK7、CK20、villin染色表达情况进行分析，比如：直肠癌中CK7—/CK20+/Villin+(7/8)，CK7—/CK20+/Villin—(1/8)。结肠癌中CK7—/CK20+/Villin+(18/23)，CK7—/CK20+/Villin—(3/23)，CK7+/CK20+/Villin+(2/23)。 4、上述细胞块进行一些组织相关特异性抗体染色情况为：直肠癌CDX2(8/8)，结肠癌CDX2(21/23)，移行细胞癌中P63、CK5/6同时阳性(6/8，其中1例肿瘤标本蜡块已切完，未能进行该两种抗体的染色，另1例为P63—，CK5/6+)，肾透明细胞癌中CD10(12/12)，乳腺肿瘤中ER+/PR+(5/6，另一例为ER+/PR—)，胃癌肿瘤中CDX2(3/10)，肺肿瘤中TTF-1(3例腺癌阳性，2例腺鳞癌呈阴性)。判断肿瘤原发部位的成功率为58/72(80.56％)。 5、有组织学诊断或随访的病人体表肿物细针穿刺病例59例。(其中20例腺癌。7例肺小细胞癌，9例淋巴瘤，5例肉瘤，10例鳞癌，5例鼻咽癌，1例间皮瘤，1例恶黑，1例间质瘤)。通过CK7、CK20、Villin及一些组织特异性抗体染色，诊断符合率达56/59(94.9％)，其中腺癌的诊断符合率为85％(17/20)。 结论： 1、对手术标本和对病人体表肿物应用执笔式负压穿刺器穿刺，并将穿刺标本利用“凝血酶细胞块制作法”制备细胞块的成功率均达到90％以上，说明二者结合使用是有效获取细胞样本的方法。 2、通过对392例肿瘤的组织芯片及72例手术手术标本的穿刺样本进行免疫组织/细胞化学分析，显示CK7、CK20、Villin三种抗体组合能够缩小肿瘤的搜寻范围，再结合器官特异性抗体(如TTF-1、CDX2等)对肿瘤来源进行分析，最终的判断成功率达到58/72(80.56％)。因此，本研究结果提示上述抗体的联合应用有助于确定细胞来源。 3、通过对病人体表肿物直接穿刺及免疫细胞化学染色，判断肿瘤来源的总体成功率为56/59(94.9％)，其中腺癌来源判断的成功率为17/20(85％)。上述结果显示针吸细胞学及免疫细胞化学的联合应用于临床，帮助确定肿瘤的组织来源。