反义寡核苷酸药物（ASON）是近年来发展起来的一种可在基因水平特异性阻断特定基因转录和表达的新型生物技术药物，可用于病毒感染性疾病、心血管系统疾病以及癌症等多种疾病的治疗。癌泰得和流感泰得为本室筛选出的两种具有较好抗肿瘤及抗病毒活性的硫代反义寡核苷酸化合物。现已将二者作为创新药物予以研究和开发。本课题旨在通过对这两种化合物的质量控制分析方法及动物体内药代动力学性质的研究，对硫代寡核苷酸质量控制中的一些关键技术进行研究与探讨，并为人体药代动力学评价奠定基础。研究工作主要包括以下三个方面：1．硫代反义寡核苷酸药物质量控制分析方法的建立确定了毛细管凝胶电泳（CGE）对硫代寡核苷酸的最佳分析条件，考察了凝胶浓度、温度、电场强度等因素对全长序列和截短序列分离的影响，该方法经条件优化后可很好地实现全长序列n和相差一个核苷的序列n-1完全分离（R＞1.5）。采用阴离子高效液相色谱（HPLC）对硫代不完全杂质（P=O）_x进行分析。经条件优化后可使全长序列n和（P=O）₁杂质达到基线分离，并可检出产品中含量为1％的硫代不完全序列。³¹p核磁共振(³¹P-NMR)谱用于检测微量的未完全硫代寡核苷酸，质谱（MS）测定产品的分子量，采用自行建立的测序方法，对癌泰得和流感泰得序列进行分析，结果表明该方法所测序列与理论序列完全一致。2．癌泰得临床前药代动力学研究建立了不同生物样品中癌泰得含量的CGE测定方法。考察了癌泰得在血浆、尿液、粪便以及胆汁中药物浓度与面积迁移时间比相对值的线性范围：血浆中为2～800μg/ml，尿液和粪便中为1～160μg/ml（μg/g），胆汁中为2～200μg/ml。该方法测得血浆样品中日内精密度为2.35％～15.94％，日间精密度为1.30％～6.85％，相对回收率在97.42％±4.20％至104.45％±16.64％之间；尿样中日内精密度为1.26％～15.13％，日间精密度为0.90％～2.94％，相对回收率在96.53％±1.66％至106.54％±12.22％之间；粪样中日内精密度为1.53％～12.97％，日间精密度为0.43％～3.75％，相对回收率在90.92％±1.39％至110.75％±7.79％之间；大鼠胆汁样品中日内精密度为3.76％～9.04％，日间精密度为1.01％～2.54％，相对回收率在96.64％±6.51％至99.20％±6.59％之间。所建方法专属性强、线性关系良好、浓度范围宽，灵敏度、精密度、准确度均能满足体内药物分析的要求。小鼠单次静脉注射低、中、高三个剂量（25、50和100mg/kg）癌泰得后，房室模型拟合结果表明体内药动学过程符合静脉注射的二室模型；统计距法计算得到平均滞留时间MRT_0-t分别为7.99、17.073和17.52min，血浆末端清除半衰期t_1/2分别为9.678、27.014和33.553min；梯形法计算得到的药时曲线下面积AUC_0-t分别为1017.28、2570.68和4366.79mg/L·min。结果表明，癌泰得在体内呈现线性动力学的特性，并在体内迅速分布和消除。通过研究癌泰得在动物体内的排泄规律可以了解到，该药是以全长序列和一系列缩短的寡核苷酸的形式从小鼠体内排泄掉。静脉给药48h内，癌泰得在小鼠尿液和粪便中总累积排泄量为7.65％，其中大部分通过尿液排泄（6.26％），其次为粪便排泄（1.39％），胆汁中排泄量极低。在不同时间段内，小鼠排泄的全长序列随时间的增加而减少，但药物与代谢物的构成基本相同，而且在尿液和粪便中的构成也基本相同。采用超滤法分别测定了癌泰得与人、比格犬、Wistar大鼠血浆以及人血浆白蛋白（HSA）的蛋白结合率，结果表明癌泰得与各种属来源的血浆蛋白结合率均较高（＞99％），并存在种属差异。癌泰得与HAS的结合率＞93％，说明在人血浆中主要与白蛋白结合，并且随着药物浓度的增加，与白蛋白的结合出现饱和现象。3．流感泰得的药代动力学研究与生物利用度测定分别对静脉注射和滴鼻两种给药途径小鼠体内的药代动力学性质进行了研究。结果表明，小鼠单次静脉注射40mg/kg流感泰得后体内药动学过程符合三室模型，单次鼻腔给药则符合非静脉给药的一室模型。静脉给药和鼻腔给药后C_max分别为425.89和11.16mg/L，MRT_0-t分别为17.327和94.04min，说明滴鼻给药与静脉给药药物在体内的维持时间更长。小鼠鼻腔给药的绝对生物利用度为51.48％。本研究还对两种给药途径肺组织中药物浓度进行了比较。结果显示，滴鼻给药时肺组织中流感泰得浓度远远高于静脉给药，并在30min达峰。二者的峰浓度C_max分别为1099.36±393.00μg/g和8.61±4.27μg/g。上述药代动力学特性提示流感泰得滴鼻给药是一种局部给药方式，且该给药方式的药效作用优于全身给药。