【摘 要】
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目的:在心肌缺血过程中,还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)对缺血心肌具有一定的保护作用,但尚缺少基因水平的研究。本课题旨在探讨原代新生大鼠心肌细胞(NRCM)缺氧缺糖再
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目的:在心肌缺血过程中,还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)对缺血心肌具有一定的保护作用,但尚缺少基因水平的研究。本课题旨在探讨原代新生大鼠心肌细胞(NRCM)缺氧缺糖再灌注(OGD/R)过程中NADPH的影响及其通过抑制CiRS-7发挥心肌细胞保护作用的机制。方法:体外培养原代新生大鼠心肌细胞,利用Hank’s平衡盐溶液(HBSS)孵育NRCM,并用 95%N2和 5%CO2 建立缺氧缺糖再灌注(Oxygen glucose deprivation/Reperfusion,OGD/R)模型;根据再灌注时间的不同和是否加药(NADPH)进行分组,用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit 8,CCK8)检测 NADPH 对 OGD/R 后 0、3、6、12、24小时NRCM存活率的影响;采用Western Blot(WB)法检测OGD/R后0、3、6小时NADPH(0.5μM)加药组和非加药组NRCM中MiR-7靶蛋白Cleaved PARP的表达水平;用qPCR法和流式细胞学分析法检测OGD/R后3小时NADPH加药组和非加药组NRCM中CiRS-7、MiR-7的表达量和凋亡程度的差异。结果:CCK8检测结果显示,OGD/R后原代新生大鼠心肌细胞存活率下降,且在OGD/R后0～6小时下降幅度最大,在OGD/R同时加入NADPH(0.5μM)可以有效提高存活率,这种保护作用在OGD/R后3小时最显著;流式细胞学检测结果显示OGD/R后原代新生大鼠心肌细胞发生明显凋亡,加入NADPH后凋亡程度减轻;WB检测结果显示:OGD/R后,原代新生大鼠心肌细胞Cleaved PARP表达量明显增加,在NADPH干预后,Cleaved PARP表达量显著降低,同样在OGD/R后3小时降低幅度最大,此时,加药组中CiRS-7的表达受到明显抑制,其“海绵作用”急剧减弱,反向增加MiR-7的表达,心肌细胞凋亡程度明显减轻。结论:NADPH通过抑制CiRS-7的表达从而减轻对MiR-7的“海绵吸附”作用,并且靶向抑制凋亡标志蛋白Cleaved PARP生成。这可能是NADPH减少原代新生大鼠心肌细胞在OGD/R后凋亡,并发挥心肌保护作用的机制之一。
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