论文部分内容阅读
目的：探讨靶向沉默COX-2基因后对胃癌BGC823细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法：应用siRNA干扰技术靶向沉默胃癌细胞系BGC823的COX-2基因表达,通过应用半定量反转录-聚合酶链反应(SqRT-PCR)检测COX-2mRNA的表达情况及其沉默效率。应用细胞计数法测定细胞的增殖能力变化,用MTT法检测转染前后其对多西紫杉醇(艾素docetaxel)、奥沙利铂(L-OHP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性的变化,应用Transwell小室检测转染前后胃癌细胞侵袭能力及迁移能力的变化,应用流式细胞术法检测转染前后胃癌细胞凋亡的变化,并通过实时荧光定量-PCR(qRT-PCR)及蛋白免疫印记法(Western blot)检测转染前后胃癌BGC823细胞中的COX-2(环氧合酶-2)、β-catenin(β-链蛋白)、MMP-9(基质金属蛋白酶-9)及Bcl-2(B淋巴细胞瘤/白血病-2)等基因的表达变化。结果：通过SqRT-PCR检测胃癌细胞BGC823对COX-2、β-catenin高表达,转染后siRNA后可有效降低胃癌细胞COX-2mRNA的表达,沉默COX-2基因后β-catenin mRNA也明显表达降低。通过细胞计数法检测发现转染后第四天胃癌细胞BGC823细胞增值能力明显下降(P<0.05),MTT法检测转染后胃癌细胞对艾素、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶的IC50较转染前分别为24h (1.90±0.11mg/L vs2.74±0.17mg/L、0.98±0.37mg/L vs1.66±0.11mg/L、0.54±0.32mg/L vs0.99±0.09mg/L,P<0.05),48h(19.46±0.50mg/L vs26.55±0.82mg/L、6.89±0.32mg/L vs10.45±0.40mg/L、2.57±0.18mg/L vs4.87±0.32mg/L,P<0.05),72h(20.38±0.89vs39.58±1.94mg/L、6.69±0.60mg/L vs14.42±1.19mg/L、3.16±0.19mg/L vs7.94±0.43mg/L,P<0.05)转染后对药物明感性明显增加。Transwell小室检测转染后迁移细胞数较转染前明显降低(97.7±6.1vs48.3±3.1P<0.05),Transwell小室检测转染后细胞跨膜侵袭细胞数较转染前明显降低(84.9±6.5vs37.6±5.2P<0.05),流式细胞术检测转染后胃癌细胞凋亡率较转染前为(16.14%±1.89%vs3.08%±0.27%,P<0.05),转染后凋亡明显增加。qRT-PCR检测转染48h后COX-2mRNA、β-catenin mRNA、MMP-9mRNA及Bcl-2mRNA的表达较转染前分别为(113.24%±5.46%vs16.43%±1.47%、95.26%±4.27%vs34.44%±5.63%、103.42%±3.88%vs43.25%±5.26%、91.00%±6.74%vs34.22%±3.63%,P<0.05),转染后COX-2mRNA、β-catenin mRNA、MMP-9mRNA及Bcl-2mRNA的表达均明显下降,差异具有统计学意义。Western blot检测转染后48hCOX-2、 β-catenin、MMP-9及Bcl-2等基因蛋白表达较转染前分别为(133.95%±7.66%vs34.10%±3.33%、122.35%±5.13%vs37.70%±3.32%、111.65%±2.73%vs55.25%±4.64%、117.65%±6.52%vs60.46%±2.38%,P<0.05),转染后COX-2、β-catenin、MMP-9及Bcl-2蛋白的表达均明显下降,差异具有统计学意义。结论：下调COX-2基因的表达,可有效抑制WNT信号通路的激活,同时降低MMP-9及Bcl-2基因的表达。抑制COX-2基因后降低胃癌细胞BGC823的细胞增殖、迁移及侵袭能力,可提高对艾素、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶的药物敏感性,有效促进细胞凋亡。