本论文研究内容是水牛垂体催乳素cDNA的克隆与原核表达。论文第一部分包括第一章，为文献综述部分；第二部分包括第二章和第三章，为试验部分。水牛是我国南方重要的经济动物物种，有乳质好和耐粗饲等优点，不足的是其繁殖力和泌乳能力远远低于奶牛。催乳素是一种由垂体前叶分泌的多肽类激素，对催乳素的研究表明，它可以提高繁殖力和促进泌乳。本试验的目的，就是通过催乳素基因cDNA的克隆与原核表达，对催乳素基因的结构和功能进行初步探索和揭示，为提高水牛的繁殖力和泌乳能力打下理论基础。论文第二章的研究内容是水牛垂体催乳素基因的cDNA克隆和序列分析。根据几种哺乳动物催乳素基因cDNA序列保守区，设计一对特异性引物，从水牛脑垂体中提取总RNA，利用RT-PCR技术扩增水牛催乳素基因cDNA序列，并重组到pMD18-T载体，对PCR和双酶切鉴定为阳性的克隆进行测序，序列测定结果表明：该cDNA序列开放阅读框(ORF)，长度为690bp，推测编码氨基酸为229个，其中前19个氨基酸为信号肽。用NCBI上的BLAST功能将测序结果同GenBank上已发表的哺乳动物PRL序列进行比对，呈现高度的进化保守性，与牛属动物同源性高达98.4％，证明所克隆的序列为水牛催乳素基因的cDNA序列。该基因序列已提交到GenBank(登录号：EF054878)。本试验首次成功扩增了水牛催乳素cDNA序列，该序列涵盖了水牛催乳素cDNA的全部ORF区，为进一步研究水牛的催乳素基因原核表达奠定了基础。论文的第三章研究内容是水牛催乳素基因的原核表达，在得到的水牛催乳素基因cDNA序列的基础上，重新设计带有酶切位点的引物，扩增去除信号肽序列的催乳素基因目的片段，然后将该目的片段与高效表达载体pQE-30同时进行BamHⅠ和HindⅢ双酶切，酶切产物用T4连接酶连接，连接后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，成功构建了体外表达催乳素蛋白的原核表达载体pQE-30-PRL。经PCR和双酶切鉴定其连接方向的正确性，将鉴定为阳性的重组表达载体pQE-30-PRL转化到表达工程菌M15中，加入IPTG进行诱导表达，SDS-PAGE电泳鉴定显示，获得了清晰的外源基因目的蛋白带。分析表明表达的催乳素蛋白分布在不可溶蛋白部分，分子量在23kDa左右，与理论分子量结果相符合。外源重组融合蛋白的成功表达为下一步分离纯化目的蛋白做好了充分的准备，为进一步研究PRL基因的结构及功能奠定了坚实的基础。