研究背景：中医对复方的煎煮十分讲究,古时的《金匮要略》、《伤寒论》都对煎服法进行了详细的探讨,书中指出煎药水量、煎煮次数、煎煮火候、入药方法(先煎、后下、包煎、烊化等)都对药效产生一定得影响,越来越多的学者开始关注中药煎煮过程的作用价值。复方化学成分是发挥药效作用的物质基础,采用成分分析的手段跟踪复方中的化学成分在煎煮过程中的变化具有一定的可行性,常见的方法体系如HPLC、UV等,对于揭示复方的作用特点和煎煮方法内涵有一定科学意义。另一方面,复方的化学成分非常复杂,多数成分含量不高,部分成分之间互相形成检测干扰,这些都进一步制约了化学成分分析所能表达的内涵。本文尝试采用多种分析定量手段分析跟踪柴葛解肌临床煎煮方法不同因素对成分保留及变化的影响,同时配合各试验条件下不同溶剂部位总体出膏率变化趋势的研究方法,从多角度看待复方煎煮过程化学成分构成与变化趋势,为柴葛解肌的临床煎煮使用经验提供科学依据,同时也为临床复方汤剂的成分跟踪与评价提供可借鉴的思路。研究目的：柴葛解肌临床验方主要用于治疗小儿高热不退,并具有热退不反复的显著疗效。本实验通过对复方中化学成分变化规律进行研究,以揭示复方临床使用经验中所蕴含的科学内涵,为柴葛解肌临床验方的开发提供理论支持,并为将该临床经验方开发成为疗效好,服用量小,医从性佳的现代中成药提供良好的研究基础。研究方法：1、采用GC-MS对柴葛解肌临床验方标准煎煮液的挥发油类成分进行分析鉴定,并进行归属分析；与煎煮60min的复方水煎液进行比较,探索内在规律变化趋势。2、采用高效液相色谱法检测柴胡水煎煮液的柴胡皂苷,并检测柴胡水煎煮液在纯化过程及其他药材共煎过程中原生柴胡皂苷水解转化情况,建立柴葛解肌临床验方柴胡皂苷a的分析方法,考察煎煮时间、溶剂体积、提取次数对复方中柴胡皂苷a的影响,根据临床使用情况验证工艺。3、采用HPLC建立柴葛解肌临床验方乙醚部位欧前胡素及异欧前胡素和正丁醇部位黄芩苷的分析方法,考察煎煮时间、溶剂体积、提取次数对复方中欧前胡素、异欧前胡素和黄芩苷的影响,根据临床使用情况验证工艺。4、以出膏率为指标监控更多检测不到的化学成分,测定复方和各单味药材的不同极性部位的出膏率,计算复方不同煎煮工艺和各单味药材的不同极性部位所占比例,进行比较分析。结果：1、柴葛解肌临床验方标准煎煮液所保留的挥发油类成分大多为小分子化合物,煎煮60min汤剂大多保留的是相对分子量较大的挥发油类成分。2、通过高效液相图谱分析发现,柴胡水煎液柴胡皂苷d已经完全氧化降解为柴胡皂苷b2,柴胡皂苷a也部分降解为b1,并且含量较少。正丁醇萃取纯化、大孔树脂纯化及醇沉纯化三种方法均可有效富集柴胡皂苷a,而醇沉法更有利于减少柴胡皂苷a的转化。柴胡与不同药材共煎,未发现非常显著的增加柴胡皂苷a的氧化降解情况,提示复方煎煮液中可能保留极少量的柴胡皂苷a,低于液相紫外检测器的检测限,可采用液质联用等更高灵敏度的检测定量方法对复方中的柴胡皂苷a进行详细定量分析。采用液质联用技术建立柴葛解肌临床验方中柴胡皂苷a的含量测定方法,经方法学论证,线性关系良好,样品精密度和稳定性较高,加样回收率为98.53%,该方法成功用于柴葛解肌临床验方中柴胡皂苷a的含量测定。通过单因素考察,确定煎煮30分钟,溶剂体积为1600mL,或提取次数越多越好,柴胡皂苷a的提取率最高。采用正交设计实验优化处方,对提取时间、溶剂体积、提取次数进行三水平实验,对柴胡皂苷a提取率影响因素的大小顺序为B(溶剂体积)>A(煎煮时间)>C(提取次数)。考虑临床应用情况,模拟两种煎煮方法,得最佳工艺：1600mL的水煎煮1次,30min。3、采用高效液相色谱法系统的建立了乙醚部位欧前胡素及异欧前胡素和正丁醇部位的黄芩苷的分析方法,并以提取率为指标,通过单因素下考察,得到各成分的最佳提取工艺条件,欧前胡素1600mL水煎煮3次,每次30min；异欧前胡素1600mL水煎煮3次,每次30min；黄芩苷1600mL水煎煮3次,每次60min。4、在复方不同煎煮条件下发现,和煎煮15min相比,煎煮30min柴葛解肌临床验方标准煎煮液乙醚可溶部位的比例下降、正丁醇上升、水部位的比例下降,和煎煮30min相比,煎煮60min柴葛解肌临床验方标准煎煮液乙醚可溶部位的比例下降、正丁醇可溶部位的比例下降、水部位比例上升。但各药材同样条件下对比,趋势与复方不尽一致。如柴胡煎煮30分钟不同极性溶剂可溶部位与煎煮15分钟同极性溶剂可溶部位比较,乙醚可溶部位的比例呈下降趋势,正丁醇可溶部位的比例呈上升趋势。提示可能和药材的性质、成分相关。结论：1、临床总结出的“严格按照煎煮15分钟,煎煮两次方可保证疗效”在挥发性成分保留上具有一定科学依据。2临床经验所使用的方法也可获得相对较高的柴胡皂苷a,这可能也是临床使用经验中“煎煮15分钟”内涵之一。3欧前胡素和异欧前胡素的变化规律提示缩短煎煮时间更好地保留香豆素类成分,而黄芩苷的变化规律和本方煎煮15分钟的科学内涵相矛盾,提示复方中指标成分的变化规律不尽相同,应当综合考虑指标成分的变化规律。4、采用重量法检测方中不可检测成分,一定程度上揭示了色谱法无法监控方中每个化学成分的变化规律的不完整,补充了以总量的变化规律代替复方中各化学成分变化的方法。