论文部分内容阅读
目的:探讨携带埃博拉病毒膜蛋白(Ebola Virus Glycoprotein,EboGp)的HIV-1病毒样颗粒(Virus like particle,VLP)的免疫原性。方法:1.包装VLP:(1)用质粒HIVgp120、EbovGp、EbovGpAM、Δ8.2和Gluc通过PEI转染法获取所需 VLP:HIVgp-VLP、EbovGp-VLP、EbovGpΔM-VLP、HIVgp/EboGp-VLP和HIVgp/EboGpAM-VLP;(2)检测所得VLP包装是否成功:蛋白印迹法(Western Blot,WB)定性检测VLP中相关蛋白:HIVgp120蛋白、HIV P24蛋白、EboGp蛋白和EboGpΔM蛋白是否正确表达;酶联免疫法(Enzyme-link Immunosorbent Assay,ELISA)定量检测VLP中的HIV P24量。2.细胞实验:100ng/100μlPBS的VLP:HIVgp-VLP、EbovGp-VLP、EbovGpΔM-VLP、HIVgp/EboGp-VLP和HIVgp/EboGpAM-VLP分别感染C8166细胞、THP1细胞、单核细胞来源的巨噬细胞(Monocyte Derived Macrophages,MDMs)和单核细胞来源的树突状细胞(Monocyte Derived Dendritic cells,MDDCs),感染3天后检测4种细胞上清液的荧光素酶反应值(Gaussia Luciferase Assay,Glue),以此比较不同VLP靶向进入目的细胞的量。3.动物实验:(1)HIVgp(M)组动物实验:9只6周龄雌性健康Balb/c小鼠,随机分成3组:PBS组(对照组)、HIVgp(M)组和HIVgp(M)/EboGp组,每组3只。分别于第0天、第14天和第49天在各组小鼠的颈背部皮下注射相应的VLP 100ng/100μl PBS,第56天采取小鼠腿部隐静脉血200μl,ELISA检测血清中的抗-HIVgp120抗体、抗-HIV P24抗体量;(2)HIVgp(T)组动物实验:12只6周鼠龄健康雌性Balb/c小鼠,随机分成4组:PBS(对照组)、HIVgp(T)-VLP组、HIVgp(T)/EboGp-VLP组和HIVgp(T)/EboGp ΔM-VLP组,每组3只。分别于第0天、第14天和第49天在各组小鼠的颈背部皮下注射相应的VLP 100ng/100μl PBS,第56天采取小鼠腿部隐静脉血200μl,ELISA检测血清中的抗-HIVgp120抗体、抗-HIV P24抗体量。结果:1.转染获得的VLP:HIVgp-VLP、EbovGp-VLP、EbovGpAM-VLP、HIVgp/EboGp-VLP和HIVgp/EboGpΔM-VLP。WB可见HIVgp 120蛋白(120KD),HIV P24蛋白(24KD),EboGp蛋白(75KD)和EboGpAM(40KD)蛋白。2.细胞实验:(1)EboGp-VLP、HIVgp-VLP和HIVgp/EboGp-VLP分别感染C8166细胞后,HIVgp(T)-VLP组Gluc值高于其它各组(P<0.05);感染MDMs和MDDCs细胞后,EboGp-VLP组和HIVgp(M)/EboGp-VLP组Glue值高于HIVgp(M)-VLP组(P<0.05);(2)HIVgp-VLP、EboGp-VLP、HIVgp/EboGp-VLP、EboGpΔM-VLP 和HIVgp/EboGpΔM-VLP 分别感染 THP1 细胞、MDMs 和 MDDCs,HIVgp/EboGpΔM-VLP组上清液Gluc值高于其它各组(P<0.05)。3.动物实验:(1)HIVgp(M)组动物实验:HIVgp(M)/EboGp-VLP免疫的雌性Balb/c小鼠血清抗-HIVgp120抗体、抗-HIV P24抗体量均明显高于其它各组(P<0.01);(2)HIVgp(T)组动物实验:HIVgp(T)/EboGp-VLP免疫的雌性Balb/c小鼠血清抗-HIVgp120抗体、抗-HIV P24抗体量均明显高于其它各组(P<0.01);HIVgp(M)/EboGp-VLP与HIVgp(T)/EboGp-VLP相比,两组小鼠产生抗体量的差别无统计学意义(P>0.05)。结论:1.EbovGp和EbovGpΔM均可促进VLP靶向进入C8166细胞、THP1细胞、MDMs和MDDCs细胞,且EbovGpAM的促进能力强于EbovGp;2.HIVgp(M)/EboGp-VLP通过靶向巨噬细胞、HIVgp(T)/EboGp-VLP通过靶向T细胞均可在雌性Balb/c小鼠体内诱导更高的抗-HIV抗体量。