【摘 要】
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聚酮化合物(PKs)是一类具有生物活性和药用活性的次级代谢产物。为了进一步提高聚酮化合物的产量,异源表达是非常值得尝试的方法。本文旨在毕赤酵母中构建一个适合聚酮合成酶
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聚酮化合物(PKs)是一类具有生物活性和药用活性的次级代谢产物。为了进一步提高聚酮化合物的产量,异源表达是非常值得尝试的方法。本文旨在毕赤酵母中构建一个适合聚酮合成酶(Polyketide synthases, PKS)功能研究和高效异源表达的平台。首先通过体外添加橘霉素聚酮合成酶的ACP功能域,小分子荧光标记的CoA以及磷酸泛酰巯基乙胺转移酶(PPTase)的方法,验证了毕赤酵母中异源表达的来自于构巢曲霉的npgA基因,其产物具有PPTase活性,可以将PKS的ACP功能域进行有效修饰。实验中将来自土曲霉的6-MSAS(6-甲基水杨酸聚酮合成酶),来自Talaromyces stipitatus的MOS (3-methylorcinaldehyde合成酶)和来自紫红曲霉的pksCT(橘霉素聚酮合成酶)分别与PPTase在毕赤酵母菌株中共表达。通过甲醇诱导,在AOX1启动子的调控下,共表达PPTase和6-MSAS的酵母菌株,成功得到产物6-甲基水杨酸。通过5L罐中67h的发酵,重组毕赤酵母Mut+菌株的湿重达到238g/L,6-甲基水杨酸的产量达到2.2g/L。而来自Talaromyces stipitatus的MOS和来自紫红曲霉的pksCT分别与PPTase的毕赤酵母菌株中共表达时,未得到聚酮产物,其原因还需进一步探讨。
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