人绒毛膜促性腺激素(hCG)不仅在孕期妇女胎盘滋养层细胞分泌，而且在多种肿瘤组织、细胞中有所表达，其β链(hCGβ)在合适的载体及途径转运下进入机体可以打破机体的免疫耐受，诱导产生抗hCGp的免疫反应。因此，hCGβ作为肿瘤相关抗原进行的抗肿瘤免疫研究已经成为热点。本研究以hCGβ作为靶抗原，以载体pVAXl改造后获得pVAON33作为真核表达载体，构建携带有全长hCGβ(hCGβ<'FL>)的核酸疫苗质粒pVAON-hCGβ<'FL>。肌肉注射小鼠及转染人肝细胞系结果证明：hCGβ在真核细胞中成功地获得了表达。应用该基因疫苗pVAON-hCGβ<'FL>连续免疫小鼠三次后，可诱导小鼠显著的抗hCGp的特异性抗体的产生。体外经特异性抗原刺激后，免疫鼠脾细胞产生显著地特异性增生、抗hCGβ的特异性CTL反应。并于最后一次免疫后两周，可以抵抗肿瘤细胞的攻击，并保护66％以上的小鼠免受肿瘤细胞的侵袭。 基于hCGβ的核酸疫苗免疫小鼠的实验结果，为进一步探讨该基因疫苗在大动物(非人灵长类-恒河猴)是否具有类似于在小鼠体内诱导的免疫应答。将构建的核酸疫苗质粒pVAON-hCGβ<'FL>，采用体内电转染方式，三次免疫恒河猴，通过监测免疫恒河猴体液免疫反应、外周血淋巴细胞(PBMC)的体外免疫学实验评价疫苗的免疫效果。结果证明：以500μgpVAON-hCGβ<'FL>／只的剂量体内电转染恒河猴，可以诱导恒河猴明显的PBMC特异性的增生、CTL杀伤活性以及表达细胞因子的数目显著的提高，同时也可诱导一定水平的抗hCGβ特异性抗体。为增强该核酸疫苗的免疫效果，本研究克隆了人白细胞介素18(ILl8)基因，并以pVAON-ILl8为分子免疫佐剂，与核酸疫苗：pVAON-hCGβ<'FL>联合免疫恒河猴。实验结果表明：联合免疫组恒河猴可诱导显著的细胞免疫反应，刺激产生特异性PBMC的增生、特异性CTL杀伤活性，并可诱导产生显著的以Thl型细胞因子(IFN<-Y>,IL-2和IL-12)表达为主的细胞免疫反应。 hCGβ羧基端37肽具有被淋巴细胞TCR和BCR识别的肿瘤抗原表位。因此，为了克服机体内的多种激素(hLH、FSH，TSH)与hCGβ存在的可能交叉免疫反应，我们选用该多肽作为肿瘤相关抗原进行抗肿瘤免疫应答的研究，即以hCGβ羧基端37肽为肿瘤抗原靶基因，以pVAON33为载体，构建含有四个hCGl3羧基端37肽的串联基因的质粒pVAON-hCGβ<'4R>。PCR及蛋白印记法证实该质粒在哺乳动物细胞中可有效表达。以体内电转染方式将质粒直接导入恒河猴，体内基因免疫三次，每次间隔4周，末次免疫后10天采血，以淋巴细胞增殖实验、ELISPOT细胞因子检测、细胞毒杀伤实验以及ELISA检测抗体效价等方法评价pVAON-hCGβ<'4R>基因免疫恒河猴诱导的细胞免疫和体液免疫反应。结果表明：基因疫苗pVAON-hCGβ<'4R>。体内电转染免疫恒河猴诱导机体致敏淋巴细胞产生了增强的特异性增殖、杀伤靶细胞效应以及特异性抗体。外周单核细胞中IFN-γ、IL-2及IL-12的分泌形成细胞数(SFC)显著增加，体外致敏淋巴细胞可对携带有hCGβ重组逆转录病毒感染的自体B淋巴细胞具有显著的杀伤活性，揭示该疫苗免疫恒河猴后诱生了以Thl型细胞免疫反应为主的细胞免疫反应。 本研究基于hCGβ基因疫苗诱导的抗肿瘤效应提供了理论研究基础和实验依据，并为下一步将该新型基因疫苗应用于人的肿瘤临床预防和治疗研究奠定基础。