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工作目的:放射性膀胱损伤是盆腔放疗中常见的并发症,临床中常常只能对症治疗而缺乏有效的治疗手段。放射性膀胱损伤早期多表现膀胱组织内氧化应激损伤,晚期进展为膀胱纤维化以及广泛出血。在损伤早期减轻组织内氧化应激水平可以减少组织受到的放射性损伤。丹参酮Ⅰ已在多个研究中证实有强大抗氧化应激能力。本实验主要探索丹参酮Ⅰ(T-1)在放射性膀胱损伤早期的治疗作用以及可能的作用机制,为膀胱可能遭受放射性损伤的患者提供早期预防与治疗的选择。研究方法:把人永生化上皮细胞(SV-HUC-1)以及雌性6周龄ICR小鼠分为以下四组:对照组(不给任何处理,Control),T-1处理组(给予丹参酮Ⅰ处理,T-1),X-射线照射组(给予X-射线照射,X-ray),T-1治疗组(给予X-射线照射并给予T-1处理,X-ray+T-1)。使用cck-8以及DCFH-DA活性氧试剂盒比较各组细胞受损情况以及细胞内氧化应激水平,进而评估丹参酮Ⅰ对细胞的保护作用。提取各组细胞总RNA,通过实时定量PCR检测各组细胞Nrf2-ARE信号通路的mRNA变化。提取各组细胞以及小鼠膀胱总蛋白,通过Western-Blot法测定各组细胞以及小鼠膀胱组织中Nrf2信号通路相关蛋白表达。提取各组细胞以及小鼠膀胱核蛋白,通过Western-Blot法测定各组细胞以及小鼠膀胱组织中Nrf2蛋白在细胞核内的表达情况。通过siRNA沉默细胞中nrf2表达,按照之前的分组方法进行分组及相应处理,通过cck-8试剂盒测量Nrf2敲降后各组细胞的活力变化。留取小鼠膀胱组织,石蜡切片,HE染色,观察各组小鼠膀胱粘膜厚度变化。使用WST-1法检测小鼠膀胱组织中SOD变化,进而评估丹参酮Ⅰ对小鼠膀胱组织的保护作用。结果:在体外实验中T-Ⅰ治疗组的细胞活力高于X-射线照射组,同时T-1治疗组细胞中活性氧水平低于 X-射线照射组。T-1 治疗组中Nrf2,HMOX1,GCLC,NQO1,GPX2总蛋白以及mRNA表达量相较于X-射线处理组有不同程度的升高,同时T-1治疗组核蛋白中Nrf2表达量较高。Nrf2敲降细胞中T-1治疗组细胞活力与X-射线照射组细胞无明显差异,而NC组细胞T-1治疗组细胞活力较X-射线照射组升高。在体内实验中T-1治疗组小鼠膀胱黏膜平均厚度小于X-射线照射组,同时T-1治疗组小鼠膀胱组织内SOD水平高于X-射线治疗组。T-1治疗组总蛋白中Nrf2,HMOX1,GCLC,NQO1,GPX2表达量以及核蛋白中Nrf2表达量与X-射线处理组相比均有不同程度的升高。结论:丹参酮Ⅰ在膀胱放射性损伤早期可以通过降低组织内氧化应激水平对膀胱组织有一定的保护作用。丹参酮Ⅰ对Nrf2-ARE信号通路的激活是抗氧化应激损伤的重要机制。