目的:　　1.研发一种操作便捷、灵敏度高、专属性强的磷酸化蛋白检测技术;　　2.为磷酸化蛋白的检测提供染色方法，进一步促进该领域的发展。　　方法:　　1.以红紫素为染料，聚丙烯酰胺凝胶为载体，对磷酸化蛋白进行染色，通过筛选各种影响因素，包括染色液组成成分、染料浓度、染色时间等，探索各种影响因素的最佳条件，从而建立一种完整的红紫素染色方法;2.使用一向凝胶电泳技术(1-D)，分别将标准蛋白、小鼠脑组织中提取的总蛋白和人源成纤维细胞中提取的总蛋白进行分离，并采用不同的磷酸化蛋白染色检测技术进行分析，比较各种方法的灵敏度、磷酸化蛋白专属性以及线性范围等参数;　　3.使用二向凝胶电泳技术(2-D)，分别将小鼠脑组织中提取的总蛋白和人源成纤维细胞中提取的总蛋白进行分离，并分别用红紫素染色法和Pro-QDiamond染色法进行染色分析，比较两种方法的专属性及与2-D的兼容性;4.使用Western Blot检测技术和去磷酸化检测技术，通过比较红紫素染色法与Pro-Q Diamond染色法的检测结果，验证红紫素染色法对磷酸化蛋白的专属性。　　5.使用生物质谱分析技术，鉴定实际样品中被检测到的磷酸化蛋白，进一步验证红紫素染色法对磷酸化蛋白的专属性。　　结果:　　1.以红紫素-Al3+复合物为荧光探针，对影响检测效果的各种因素进行筛选，建定了一种在聚丙烯酰胺凝胶上的磷酸化蛋白染色检测方法，具体步骤为:1)染色:将电泳后的聚丙烯酰胺凝胶放在盒子中，加入50 mL染色液(3μM红紫素，50μM Al3+，30％甲酰胺，40％甲醇，pH5.0的250 mMNaAc-HAc)，在50℃条件下，振摇50分钟;　　2)脱色:去除染色液，加入50 mL的脱色液(50％甲醇，pH4.0的500 mMNaAc-HAc)，室温振摇1-3分钟。　　2.通过一向凝胶电泳技术，确定红紫素染色法的检测灵敏度为4-8 ng，优于 Pro-Q Diamond染色法的8-16 ng;同时，红紫素染色法对磷酸化蛋白拥有较强的专属性。　　3.通过对小鼠脑蛋白和人源成纤维细胞蛋白的检测与对比，说明红紫素染色法对实际样品磷酸化蛋白的专属性略优于Pro-Q Diamond染色法。　　4.通过二向凝胶电泳技术，明确红紫素染色法无论对标准蛋白，还是对实际样品中磷酸化蛋白的检测，与2-D的兼容性跟Pro-Q Diamond染色法相似，并且重现性也比较好。　　5.通过Western Blot技术，说明红紫素染色法对实际样品中磷酸化蛋白具有较强的专属性，与Pro-Q Diamond染色法相当，甚至优于Pro-Q Diamond染色法。　　6.通过去磷酸化检测技术，说明红紫素染色法对标准蛋白和实际样品中磷酸化蛋白的专属性与Pro-Q Diamond染色法相似。　　7.通过生物质谱技术，对红紫素染色法检识出的小鼠脑蛋白和人源成纤维细胞蛋白中的磷酸化蛋白进行检测，检测到的磷酸化蛋白个数分别为11个和12个，进一步说明红紫素染色法对实际样品具有较强的专属性。　　结论:　　红紫素染色法具有操作便捷、灵敏度高、专属性强的优点，该方法只需2个步骤，耗时60分钟，灵敏度达到4-8 ng，对磷酸化蛋白具有良好的专属性，将在磷酸化蛋白质组学的发展中发挥一定的作用。