神经干细胞(neural stem cells，NSCs)可自我复制并具有多向分化潜能，在中枢神经系统损伤及退行性疾病的治疗中具有重要的应用价值。将神经干细胞移植到受损部位，可分化成机体的特定神经细胞，完成特定的神经功能。然而神经干细胞移植存在诸多技术上的难题，其中移植后神经干细胞分化并参与神经网络重建的能力成为人们关注的焦点。阐明神经干细胞的分化机制对于解决以上问题有重要理论意义和实用价值。 在神经干细胞中，树突细胞因子(dentritic cell factor 1,DCF1)基因的功能未见报道。本实验室前期研究发现DCF1基因在未分化的神经干细胞中高表达而在终末分化的神经细胞中表达量很低，由此推测此基因可能与神经干细胞的分化有关；随后克隆并在小鼠神经干细胞中过量表达此基因，发现与对照组相比，过量表达DCF1基因的细胞轴突生长被抑制，DCF1基因可维持神经干细胞的状态。为了进一步研究DCF1基因在神经干细胞分化中的作用，本研究构建了RNAi载体，分析DCF1基因被抑制后细胞的分化情况。此外，用转录因子圈套的方法探索了此基因启动子区的功能区域。本实验主要进行了以下三部分的研究： 1.研究了以电穿孔法和脂质体法转染神经干细胞系C17.2的影响因素，获得了转染的优化参数。结果显示，在C17.2细胞中，脂质体法转染效率优于电穿孔法。在24孔板中1.5μgDNA和1μl Lipofectamin2000的组合可得到70％以上转染率。 2.构建了四个RNAi载体以及一个序列打乱的对照载体。在转录后水平上抑制DCF1基因的表达。结果显示当DCF1基因抑制后，神经干细胞分化神经元和胶质细胞，免疫组化证实主要向胶质细胞分化，差异显著(p＜0.01)。首次证实了DCF1基因对神经干细胞分化的抑制作用，已申请发明专利，申请号：200610026207.1。 3.用转录因子圈套的方法，在转录水平抑制了DCF1基因表达。在基因的启动子不同区域设计了三个高亲和力的寡核苷酸(oligodeoxynucleotid，ODNs)，结果表明其中一个ODNs可显著抑制DCF1基因的表达，序列为：aca cac aat aca aa，提示可能为重要的功能区。 本研究表明，针对DCF1 cDNA序列构建的RNAi真核表达载体能够特异性抑制DCF1基因的表达，可作为特异性阻断DCF1基因表达并评价其功能的有力手段；DCF1基因沉默后促进神经干细胞向神经胶质细胞和神经元分化；转录因子圈套发现了在DCF1基因启动子区可能的调控区域。