论文部分内容阅读
背景及目的:吗啡是由鸦片提炼的一种鸦片生物碱,属阿片类物质,它是临床减少急性或慢性疼痛最有效的药物之一。但吗啡滥用会通过中脑边缘多巴胺系统产生强烈的奖赏效应从而导致吗啡成瘾。使用吗啡后个体产生欣快感,而停止使用后则有各种功能紊乱和戒断综合症。为了追求欣快感并避免痛苦,个体将不惜一切代价获得吗啡。吗啡戒断后也极易复吸。吗啡成瘾不仅影响个体身心健康,还会对社会安全造成严重危害。吗啡成瘾机制的研究不仅有助于卫生事业管理部门有效地预防和治疗吗啡成瘾,减少其带来的医疗和社会问题,而且有助于临床麻醉药物使用的进一步管理。吗啡成瘾与中枢神经系统(CNS)多个脑区密切相关。中脑-边缘多巴胺系统(MLDS)在吗啡成瘾中起重要作用,包括中脑腹侧被盖区(VTA)和伏隔核(NAc)等。成瘾相关行为与促炎免疫反应紧密联系。最近的研究表明,长期吗啡处理可激活VTA区多巴胺能神经元上的免疫信号通路,提示VTA区的促炎反应在吗啡奖赏效应中至关重要,但其机制仍不清楚。Toll样受体家族是中枢系统中的重要免疫受体,参与抵抗病源体对机体的入侵和适应性免疫反应的聚集。其中TLR4是1997年最先被发现的哺乳类动物的Toll样受体。研究表明,VTA区TLR4信号通路参与调控可卡因所引起成瘾及觅药行为,但其在吗啡成瘾中的作用机制仍不清楚。STAT3是信号传导及转录激活因子家族(STAT)中最重要的转录因子之一,与促炎、免疫信号通路具有紧密联系。研究表明,LPS/TLR4能够诱导促炎反应,激活STAT3信号通路,调控免疫炎症疾病的发生。激活VTA区STAT3(p-STAT3)对跑步奖赏效应和食物摄取十分重要。本研究阐明大脑VTA区在吗啡成瘾中的分子机制是预防和治疗成瘾的基础。研究拟探讨在吗啡成瘾过程中,VTA区TLR4所介导的中枢免疫促炎信号通路的作用机制,同时研究VTA区TLR4是否通过激活其下游STAT3信号通路参与吗啡奖赏效应的获得和维持。对象与方法:选用成年雄性SD大鼠和STAT3flox/flox小鼠为研究对象,采用随机双盲方法,运用条件性位置偏爱测试、核团微量注射、免疫荧光组织化学以及Western blot等方法研究激活VTA区TLR4/STAT3信号通路在吗啡诱导的CPP中的作用。结果:1.通过行为学测试发现在VTA区注射TLR4拮抗剂LPS-RS或STAT3抑制剂S3I-201可阻断吗啡诱导的CPP获得;2.通过行为学测试发现吗啡CPP获得后,在大鼠VTA区内单次注射LPS-RS或S3I-201,即两种药物急性给药,无法阻断吗啡CPP表达。而CPP获得后连续5天在VTA区LPS-RS或S3I-201可阻断吗啡CPP维持;3.Western-blot分析表明,长期吗啡注射诱导VTA区磷酸化STAT3的表达水平显著增高,进而介导吗啡CPP的形成;4.STAT3flox/flox小鼠VTA区注射AAV-Cre-GFP后,AAV-Cre-GFP与多巴胺能神经元标记物TH阳性细胞共表达,VTA区STAT3蛋白和mRNA显著减少,且位置偏爱积分显著下调,即敲除VTA区STAT3可阻断吗啡CPP获得;5.吗啡CPP获得后VTA区TLR4与p-STAT3阳性细胞共表达,而抑制TLR4后,STAT3磷酸化水平显著降低。结论:激活VTA区TLR4/STAT3信号通路在吗啡CPP的获得和维持中起重要作用,并且为该通路可能为吗啡成瘾疗法的潜在靶点提供新证据。