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本论文的研究目的是利用基因工程手段培育具有生物安全性的转植酸酶基因玉米,使其降解植酸、释放无机磷,从而使转基因玉米成为高附加值的动物饲料,提高单胃动物对磷的利用率,降低植酸磷对环境的污染。 我们构建了仅含有启动子序列、植酸酶基因和终止子序列的线性基因转化元件(UPN)及其两端分别带有T-DNA边界序列(T-UPN)或一段载体序列(V-UPN)的不同线性转化元件,不含选择性标记基因和载体骨架序列,采用花粉管通道法对选定的玉米品种进行转化,共计收获的可以检测的种子为20400粒。 对728株T1代转化玉米的PCR检测结果表明,UPN、T-UPN、V-UPN三个转化元件的阳性率分别为0.44%、2.2%和1.8%,平均转化率为1.5%。检测时,以种子在果穗上的不同位置分别播种、检测,结果表明,PCR阳性株都是来源于第五圈至第九圈的种子,这个部位的阳性率达到3.57%,说明花粉管通道法转化玉米的成功率与种子所处的位置有关。本实验结果还表明,玉米授粉后20个小时左右是最佳转化时间,而转化成功率在玉米的不同株系间没有明显的区别。 Southern-blot结果证明,外源植酸酶基因已经整合到玉米基因组中。RT-PCR和植酸酶比活结果说明外源基因在植株内实现了RNA水平和蛋白质水平的表达。 上述结果表明,通过花粉管通道法进行无载体无选择标记基因的线性化基因转化玉米是可行的,这一技术解决了选择标记基因和载体骨架序列带来的安全隐患。本研究获得的转植酸酶基因玉米材料,为选育出高植酸酶玉米品系奠定了基础。