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目的：人类多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)催化O-聚糖合成的第一步反应，将UDP-GalNAc上的GalNAc基因转移至蛋白多肽链上特定序列中的Ser或Thr，从而合成GalNAcα-O-Ser／Thr，初步研究提示该酶可能与肿瘤的生长和转移有关。ppGalNAc-T2是该家族中组织分布及底物谱较广的成员，作为O-糖链合成的起始酶，很有可能是0-糖链合成的限速酶，有着重要的生物学意义。本文旨在探讨ppGalNAc-T2在肿瘤浸润转移及增殖中的作用。
方法：遵循RNA干扰目标序列的选取原则，利用互联网资源，对ppGalNAc-T2基因mRNA序列设计五条可能的小干扰RNA(siRNA)，并且由PCR方法扩增得到带有RNApoiⅡI启动子的siRNA内源表达系统，脂质体介导转染至人胃癌细胞株SGC7901，运用RT-PCR方法检测转染后各细胞株ppGalNAc-T2mRNA水平的表达变化，筛选出其中ppGalNAc-T2抑制效率最高的siRNA；化学合成带荧光标记的该段RNAOligo，转染细胞并用荧光显微镜观察转染情况，RT-PCR方法检测转染后细胞ppGalNAc-T2的表达，进一步鉴定该siRNA对ppGalNAc-T2的抑制作用；将这段siRNA插入到RNA干扰真核表达载体pSilenCircle中，脂质体介导转染人胃癌细胞株SGC7901，经G418筛选后，利用RT-PCR和Westernblot方法检测MMP2、MMPl4、TGF-β1等肿瘤浸润转移相关基因的表达变化，通过MTT法检测细胞增殖的变化。
结果：筛选得到能高效引起ppGalNAc-T2基因表达沉默的siRNA，成功构建了ppGalNAc-T2的RNA干扰真核表达载体并转染入细胞，得到稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株。转染了重组载体后的细胞，随着ppGalNAc-T2表达的下调，MMP2、MMPl4、TGF-βl等基因在mRNA和蛋白质水平的表达不同程度地增高了，细胞增殖水平则较原细胞株有所降低。
结论：稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株为今后进一步深入研究ppGalNAc-T2的生物学功能开辟了新道路。同时由于TGF-β1、MMP2、MMPl4都是与肿瘤的浸润转移、增殖相关的指标，因此推测ppGalNAc-T2与肿瘤的浸润转移、增殖密切相关。