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本研究分为二部分:
第一部分:HOXA11在多囊卵巢综合征和正常卵巢中的表达及意义
目的:
比较多囊卵巢综合征(PCOS)与正常卵巢的卵泡黄素化颗粒细胞和卵泡液中HoxA11的表达及其差异,探讨HoxA11基因在卵巢病理和生理过程中的作用及意义。
方法:
收集卵泡液77例,其中PCOS组35例,正常卵巢组42例。从卵泡液中分离提取卵泡黄素化颗粒细胞。
1)采用免疫荧光法对黄素化颗粒细胞中的HoxA11 进行蛋白定位;
2)采用半定量RT-PCR 方法检测黄素化颗粒细胞中HoxA11mRNA的表达;
3)采用Western-blot法检测黄素化颗粒细胞中HoxA11的蛋白表达水平;
4)采用Elisa法检测卵泡液中HoxA11的表达水平。
结果:
1. 免疫荧光结果显示:在PCOS组卵泡黄素化颗粒细胞中有HoxA11的表达,主要定位于细胞核,细胞浆中可见少许弱荧光颗粒;正常卵巢组的卵泡黄素化颗粒细胞的细胞核和细胞浆中可见大量红色荧光颗粒,即HoxA11表达。PCOS组与正常卵巢组比较,细胞核和细胞浆中HoxA11的表达都明显减少。
2. RT-PCR 结果显示:PCOS组与正常卵巢组卵泡黄素化颗粒细胞中均能检测到HoxA11mRNA表达,PCOS组HoxA11mRNA表达水平较正常卵巢组低,两者之间的差异具有显著性意义(P<0.05)。
3. Western-blot 结果显示:PCOS组与正常卵巢组卵泡黄素化颗粒细胞中均能检测到HoxA11 蛋白的表达,PCOS组HoxA11 蛋白的表达水平较正常卵巢组低,两者之间的差异具有显著性意义(P<0.05)。
4. Elisa 结果显示:在PCOS组与正常卵巢组的卵泡液中均能检测出HoxA11的表达,在PCOS组的卵泡液中的表达水平较正常卵巢组低,差异具有显著性意义(P<
0.05)。
结论:
多囊卵巢综合征和正常卵巢的卵泡黄素化颗粒细胞和卵泡液中均有HoxA11表达,但是在两组中表达的水平不同,这种表达差异提示该基因可能与维持卵巢的正常功能密切相关,可能参与了PCOS 发病机制的某些环节。
第二部分:HOXA11表达水平与雄激素浓度的相关性及其在PCOS中的意义
目的:
1.分析血清睾酮浓度与卵泡液中睾酮浓度之间的关系,探讨PCOS 高雄激素的主要来源;
2.分析HoxA11表达水平与睾酮浓度之间的关系,探讨睾酮对HoxA11表达及卵泡发育的影响。
方法:
PCOS患者35例,药物治疗前收集其血清。随后所有对象均接受COH 长方案治疗,穿刺成熟卵泡收集卵泡液,分离提取卵泡液中的黄素化颗粒细胞。采用Elisa法测定血清和卵泡液中睾酮浓度;采用半定量RT-PCR 方法检测黄素化颗粒细胞中HoxA11mRNA的表达水平;采用Western-blot法检测黄素化颗粒细胞中HoxA11的蛋白表达水平。
根据检测结果进行相关性分析:
1)血清睾酮浓度与卵泡液中睾酮浓度的相关性分析;
2)颗粒细胞中HoxA11表达水平与卵泡液中睾酮浓度的相关性分析;
3)卵泡液中HoxA11mRNA表达水平与卵泡液中睾酮浓度的相关性分析;
4)卵泡液中HoxA11 蛋白表达水平与卵泡液中睾酮浓度的相关性分析。
结果:
1. 血清睾酮浓度与卵泡液中睾酮浓度的相关性分析结果:根据检测结果,将血清睾酮浓度(变量X)与卵泡液中睾酮浓度(变量Y)进行相关性分析,结果显示两变量呈正相关(r=0.934)。
2. 颗粒细胞中HoxA11mRNA表达水平与卵泡液中睾酮浓度的相关性分析结果:根据检测结果,将卵泡液中睾酮浓度(变量X)与颗粒细胞中HoxA11mRNA表达水平(变量Y)进行相关性分析,结果显示两变量呈负相关(r=-0.768)。
3. 颗粒细胞中HoxA11 蛋白表达水平与卵泡液中睾酮浓度的相关性分析结果:根据检测结果,将卵泡液中睾酮浓度(变量X)与颗粒细胞中HoxA11 蛋白表达水平(变量Y)进行相关性分析,结果显示两变量呈负相关(r=-0.842)。
4. 卵泡液中HoxA11 浓度与卵泡液中睾酮浓度的相关性分析结果:根据检测结果,将卵泡液中睾酮浓度(变量X)与卵泡液中HoxA11 浓度(变量Y)进行相关性分析,结果显示两变量呈负相关(r=-0.734)。
结论:
在一定范围内,血清基础睾酮浓度与卵泡液中睾酮浓度呈正相关,颗粒细胞和卵泡液中HoxA11表达水平与卵泡液中睾酮浓度呈负相关。他们之间的相互关系提示:
卵巢局部的睾酮浓度对HoxA11表达水平具有调节作用。