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研究背景淋巴水肿是由于各种原因造成淋巴管内皮细胞损伤,导致组织间隙内体液增多的慢性进行性疾病。它主要是受根治性手术和放疗所导致的淋巴管狭窄、闭塞及纤维化影响,常伴随局部炎症。炎症是具有血管系统的活体组织对各种损伤因子的刺激所发生的以防御反应为主的基本病理过程。研究发现,无论是临床上,还是实验中,炎症在淋巴水肿中都发挥着重要作用。现阶段,尽管治疗淋巴水肿的方法多样,但其成熟有效的药物治疗方案仍很欠缺。七叶皂苷钠（sodium aescinate,SA）是七叶皂苷的可溶制剂,广泛应用于脑水肿及静脉回流障碍性疾病的治疗。水通道蛋白-4（Aquaporin-4,AQP-4）是水通道蛋白家族的重要成员,常分布于多种上皮细胞、内皮细胞和其它组织结构中。近年来,人们发现,AQP-4可参与炎症反应。但有关SA和AQP-4在炎症相关的淋巴水肿中的作用及SA与AQP-4表达的相关性仍未见报道。目的本文通过临床资料及建立的细胞和小鼠模型,研究了SA在防治淋巴水肿中的作用,同时进一步研究了AQP-4在内皮细胞炎症损伤及炎症相关淋巴水肿中的表达变化,以阐明SA在淋巴水肿发生过程中的作用和机制,为药物防治淋巴水肿提供可靠的实验依据。材料与方法1、回顾性分析吉林大学中日联谊医院淋巴血管外科2021年10月至2022年2月期间收治的淋巴水肿患者的临床资料,以SA治疗的为治疗组,而用其他药物治疗的为对照组,周期为7天。然后检测其肢体围度及血生化指标,并用SPSS 22.0软件对数据进行分析。2、体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）。用CCK-8检测0.4、1.6和6.4μg/ml的SA对HUVEC的毒性,并采用2.5μg/ml和作用时间为6h的LPS构建炎症损伤细胞模型。实验分5组:空白组、模型组（2.5μg/ml LPS）、低剂量组（2.5μg/ml LPS+0.4μg/ml SA）、中剂量组（2.5μg/ml LPS+1.6μg/ml SA）和高剂量组（2.5μg/ml LPS+6.4μg/ml SA）。ELISA检测各组细胞IL-6的表达水平;RT-q PCR检测各组细胞中AQP-4的m RNA表达量;Western blot和免疫荧光检测各组细胞中AQP-4蛋白表达量。最后,使用SPSS 22.0软件和Image J软件对数据和图像进行分析。3、成年雄性C57小鼠,随机分六组:空白组、假手术组、模型组、低剂量组（0.25μg/g SA）、中剂量组（1μg/g SA）和高剂量组（4μg/g SA）。采用结扎小鼠下肢淋巴管、去除小鼠腘窝淋巴结及腹股沟淋巴结方法构建炎症相关的淋巴水肿模型。术前对所有小鼠进行腿围测量;术后低、中、高剂量组采用尾静脉注射方法给予相应剂量的SA溶液进行淋巴水肿治疗,而空白组、假手术组和模型组给予同等剂量的生理盐水。治疗周期为14天,期间分别于术后第七天和第十四天进行小鼠腿围测量,并采用近红外成像技术对小鼠下肢淋巴管增生扩张情况及淋巴管侧支循环形成情况进行检测。14天后采用安乐死法处死小鼠,用ELISA试剂盒检测各组小鼠血清中IL-6及TNF-α的表达水平;RT-q PCR检测各组小鼠淋巴管组织中AQP-4的m RNA表达量;Western blot检测各组小鼠淋巴管组织中AQP-4蛋白表达量。最后,用SPSS 22.0软件和Image J软件对数据和图像进行分析。结果1、与对照组相比,治疗组患者肢体围度明显减少（P＜0.05）,血生化指标增加量（白细胞计数、中性粒细胞百分比、CRP）均明显降低（P＜0.05）。2、细胞CCK-8检测结果表明:0.4、1.6和6.4μg/ml的SA作用6h后,细胞活性百分数与空白组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;3、细胞IL-6的结果显示:低、中、高剂量组中IL-6的相对表达量均低于模型组（P＜0.05）;4、细胞AQP-4的表达结果显示:低、中、高剂量组中AQP-4的m RNA和蛋白的相对表达量均高于模型组（P＜0.01,P＜0.05）;而免疫荧光结果与AQP-4的蛋白表达结果一致。5、小鼠腿围测量结果显示:假手术组与空白组相比,腿围无明显变化（P＞0.05）;与假手术组相比,模型组腿围明显增大（P＜0.01）;与模型组相比,低、中、高剂量组腿围明显降低,且呈现浓度依赖性变化（P＜0.05）;6、小鼠近红外成像结果显示:空白组及假手术组在第七天及第十四天时淋巴管均无明显变化;模型组在术后第七天,淋巴管有少量增生,而术后第十四天,淋巴管的增生明显增多,但并未形成明显的趋向胸导管的淋巴管侧支循环;低剂量组在术后第七天,淋巴管有明显增生,且出现明显的趋向胸导管的淋巴管侧支循环,而在术后第十四天,此现象较前更为明显;中剂量组在术后第七天,淋巴管有明显增生,且伴有淋巴管扩张,但并未形成明显的趋向胸导管的淋巴管侧支循环,而在术后第十四天,淋巴管增生及扩张情况较前更为明显,且出现趋向胸导管的淋巴管侧支循环;高浓度组在术后第七天及第十四天,均出现明显的淋巴管增生及扩张,但并未形成明显的趋向胸导管的淋巴管侧支循环。7、小鼠血清的ELISA检测结果显示:与空白组相比,假手术组的IL-6的表达量上升（P＜0.01）;与假手术组相比,模型组的IL-6表达量也明显上升（P＜0.01）;但与模型组相比,低、中、高剂量组的IL-6的表达量呈浓度依赖性降低（P＜0.05）。另外,与空白组相比,假手术组的TNF-α表达无明显变化（P＞0.05）;与假手术组相比,模型组的TNF-α表达量明显上升（P＜0.01）;但与模型组相比,低、中、高剂量组的TNF-α表达量呈浓度依赖性降低（P＜0.05）。8、小鼠淋巴管组织的RT-q PCR结果显示:与空白组比较,假手术组中AQP-4的m RNA相对表达量有所下降（P＜0.01）;与假手术组比较,模型组中AQP-4的m RNA相对表达量也明显下降（P＜0.01）;而与模型组相比,低、中、高剂量组中AQP-4的m RNA相对表达量均有所升高,且呈明显浓度依赖性（P＜0.01）。9、小鼠淋巴管组织的Western blot结果显示:与空白组比较,假手术组中AQP-4的蛋白相对表达量无明显变化（P＞0.05）;与假手术组相比,模型组中AQP-4的蛋白相对表达量明显下降（P＜0.01）;但与模型组相比,低、中、高剂量组中AQP-4的蛋白相对表达量均有所升高,且呈浓度依赖性变化（P＜0.01）。结论1、七叶皂苷钠能明显缓解及治疗炎症相关淋巴水肿,并改变其进程。2、AQP-4在炎症损伤及炎症相关淋巴水肿发生过程中有重要作用,它很可能是七叶皂苷钠抑制炎症相关淋巴水肿的一个重要靶点。