肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染会导致手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD),目前对于EV71病毒引起的疾病尚无有效的治疗方法,并且灭活疫苗能否起到预期的预防作用,仍需进一步研究。EV71病毒的衣壳蛋白VP2暴露在颗粒表面,含有决定EV71病毒免疫学性质的抗原决定簇。有研究结果表明,VP2是EV71分型的依据之一,同时在抵抗EV71的免疫应答中,VP2也是参与激活宿主细胞免疫应答的重要蛋白分子。由于EV71分型诸多,各个地区EV71病毒的流行特点普遍存在差异,本文以内蒙古地区EV71病毒C33株vp2为研究对象,克隆了该株病毒的vp2基因,了解其序列特征并原核表达充足VP2蛋白,探讨了VP2作为重组蛋白疫苗的可能性。提取该株病毒的RNA,扩增其长度为774 bp的vp2 cDNA,测序发现其编码区的第78位、288位碱基处与设计引物使用的序列(登录号HQ456307.1)不同,其中第78位碱基(G?A)和288位碱基(C?G)的差异引起了氨基酸的改变,即A?T,P?A,该结果可能是不同地区EV71病毒分型存在差异所致。随后分别构建了表达载体pET3a-VP2和pET3a-HIS-VP2,转入大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达了VP2和带有His标签的HIS-VP2蛋白。并将纯化的VP2和HIS-VP2蛋白分别免疫小鼠,注射S180细胞,制备了鼠抗VP2和HIS-VP2腹水多克隆抗体。Western Blot实验中,鼠抗VP2和HIS-VP2腹水抗体都能分别与EV71病毒发生特异性反应,而且无明显差异。随后把两种腹水抗体进行稀释,与EV71病毒共同感染Vero细胞进行中和实验,结果显示,这两种腹水抗体在稀释度为1:16时,CPE小于50%,说明对Vero细胞起到了保护作用。又通过VP2腹水抗体与EV71病毒的等体积体外中和并免疫1日龄乳鼠(200μL/只),结果显示,VP2腹水抗体对已攻毒的1日龄乳鼠具有良好的保护作用,存活率近70%。总之,本实验制备的VP2腹水抗体具有良好的免疫原性,对细胞和动物有一定的保护作用,可能成为EV71疫苗的候选者。