目的:本课题组以肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,S.pn）组氨酸激酶WalK为作用靶点,设计合成了3种新型咪唑类化合物（A、B、C）,本研究将对新合成的咪唑类化合物进行药物作用靶点、体内外抗菌活性及毒性的研究,以期筛选出细胞毒性低且抗菌活性强的抗S.pn先导化合物。方法:截短表达S.pn组氨酸激酶WalK蛋白,利用Kinase-Glo^?化学发光试剂盒检测WalK截短蛋白的活性以及咪唑类化合物（A、B、C）抑制WalK截短蛋白活性的情况;通过最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）实验,研究化合物的体外抗菌活性;构建BALB/c小鼠S.pn肺炎模型,以灌胃方式给予咪唑类化合物,观察BALB/c小鼠生存时间、肺组织及血液中细菌载量、IL-6和IFN-γ细胞因子及肺组织病理的变化,研究药物的体内抗菌活性;通过咪唑类化合物对肺癌A₅₄₉细胞的存活率影响实验及兔红细胞溶血实验,对咪唑类化合物的安全性进行评价。结果:本研究成功构建和表达了具有生物学活性的S.pn组氨酸激酶WalK截短蛋白,经Kinase-Glo^?化学发光试剂盒检测,咪唑类化合物（A、B、C）对WalK截短蛋白的活性具有一定的抑制作用,三者的IC₅₀分别为353.7 mM、58.77 mM及97.99 mM;体外抗菌实验结果表明,咪唑类化合物A和B均具有显著的抑菌及杀菌活性,前者MIC及MBC分别为2.5 mg/mL和5.0 mg/mL,后者MIC及MBC分别为5.0 mg/mL和10mg/mL,且随着化合物A和B浓度的增加,抗菌活性增强,当化合物浓度达MBC值时,S.pn的生长完全受到抑制,而化合物C的抑菌及杀菌效果不明显,其MIC及MBC均大于10 mg/mL;小鼠体内实验结果表明,在延长小鼠的生存时间上,化合物A和B与溶剂对照组相比均没有统计学差异,P>0.05,但两种化合物均能显著降低小鼠血液及肺组织中的细菌载量,化合物A组血液及肺组织中细菌载量分别为3.03±0.76 log₁₀0 CFU/mL,6.37±0.68 log₁₀CFU/mL,化合物B组血液及肺组织中细菌载量分别为3.45±0.57 log₁₀CFU/mL,6.7±0.39 log₁₀CFU/m L;另外,两种化合物能显著降低小鼠血清中细胞因子IL-6和IFN-γ的浓度,化合物A组细胞因子IL-6和IFN-γ分别为443.98±39.24 pg/mL,97.79±11.52 pg/mL,化合物B组IL-6和IFN-γ分别为483.97±45.77 pg/mL,105.81±14.13 pg/mL;除此之外,小鼠肺组织的病理切片结果表明,与溶剂对照组相比,给药组肺泡腔内炎症细胞渗出及细支气管上皮细胞变性坏死的现象不明显,肺炎和组织充血的症状较轻,两种化合物对S.pn引起的肺损伤具有一定的保护作用;咪唑类化合物A和B的安全性评价的实验结果表明,二者对肺癌A₅₄₉细胞的IC₅₀分别为240.3 mM和411.4 mM,在2倍MIC及4倍MIC浓度下,二者对兔红细胞的溶血率均低于5%,表明两种化合物的体外细胞毒性及溶血活性低。结论:1、成功表达了具有活性的WalK截短蛋白,新合成咪唑类化合物（A、B、C）是WalK截短蛋白的抑制剂;2、对咪唑类化合物进行体内外抗菌活性研究及安全性评价,最后结果显示咪唑类化合物A和B具有一定的体内外抗菌效果,化合物的毒性较低。