论文部分内容阅读
目的：通过研究脂多糖对表达Tn抗原的结肠癌细胞株DNMTs、Cosmc、T-synthase等基因表达的影响,探索外源性介质是否存在调控Cosmc基因甲基化修饰的作用,从而探讨脂多糖调控结肠癌异常O型糖基化表达的表观遗传学机制。方法：(1)细胞免疫荧光检测结肠癌细胞株在脂多糖干预前后Tn抗原的表达情况；(2)实时荧光定量PCR (Real-Time PCR)检测Tn(-)、 Tn(+)结肠癌细胞株在不同浓度脂多糖(未加干预、100ng/ml LP、1μg/ml LPS)干预后Cosmc、T-synthase、DNA甲基转移酶DNMTs等基因mRNA的表达水平；(3)甲基化特异性PCR(Methylation Specific PCR)检测Tn(-)、Tn(+)结肠癌细胞株在脂多糖干预前后Cosmc基因启动子区域DNA甲基化状态。结果：(1)Tn(.)细胞仅表达少量Tn抗原,Tn(-)、Tn(+)细胞Tn抗原表达量均随脂多糖浓度增加而增加,尤以Tn(+)细胞为甚；Tn(+)细胞在脂多糖干预前后其Tn抗原表达量均较Tn(.)细胞高。(2)两细胞株中Cosmc mRNA的表达量均随脂多糖浓度增加而减少,各亚组两两比较均有显著统计学意义(P<0.01)；两细胞株中T-synthase mRNA表达量均随着脂多糖浓度增加而减少,在Tn(.)内各亚组两两比较均有统计学意义,在Tn(+)细胞内未干预组分别与100ng/ml LPS、1μg/mlLPS两亚组两两比较有统计学意义(P<0.01)。(3)Tn(.)细胞DNMT1mRNA的表达量在脂多糖干预前后各亚组两两比较均无统计学意义(P>0.05),在Tn(+)细胞内未干预组与1μg/ml LPS组比较有显著差异(P<0.01)；在脂多糖干预前后DNMT3a、DNMT3b mRNA表达水平在两细胞株中各亚组两两比较均有统计学意义(P<0.01),且均随着脂多糖浓度增加而增加；(4)Tn(.)、Tn(+)细胞Cosmc基因启动子区域在脂多糖干预前后均成部分甲基化状态。结论：结肠癌上皮细胞株Tn抗原表达量随脂多糖浓度的增加而增加,其原因可能与脂多糖引起DNMTs表达变化进而促进Cosmc基因启动子甲基化相关。