扶正抑瘤汤诱导人肝癌裸鼠移植瘤细胞凋亡及自噬效应研究

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目的:采用BALB/C-nu裸鼠建立两种人肝癌裸鼠移植瘤动物模型(Hu-7、HepG-2);以赵健雄教授临床抗癌经验方扶正抑瘤汤,灌胃治疗18天;同时给予注射用5-氟尿嘧啶及生理盐水腹腔注射进行对照。观察肿瘤生长曲线、抑瘤率;Tunel染色检测凋亡细胞;透射电镜(TEM)检测自噬体形成情况;Western blot检测自噬相关蛋白(Beclin1、Bnip3及LC3)表达变化等指标。观察和探讨扶正抑瘤汤诱导肿瘤细胞凋亡及自噬的分子生物学效应。方法:100只裸鼠分为10组,即空白组(生理盐水对照组),扶正抑瘤汤高、中、低剂量组,5-Fu组;每组10只,建立人肝癌细胞HepG-2和Hu-7移植瘤裸鼠模型;待肿瘤体积到约100mm3时开始用药,扶正抑瘤汤灌胃给药(每日一次),5-Fu组(每周两次)和生理盐水对照组采用腹腔注射(每日一次);给药18天,于停药第二天各组处死裸鼠,剥离肿瘤称重,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率;留取肿瘤组织,Tunel染色检测扶正抑瘤汤对移植瘤细胞凋亡的作用;透射电镜(TEM)检测自噬体形成情况;Western blot检测自噬相关蛋白(Beclin1、Bnip3及LC3)表达变化。结果:扶正抑瘤汤高、中、低剂量组抑瘤率分别是49.9%,21.6%,8.2%;5-Fu组抑瘤率为74.2%;与空白组比较,扶正抑瘤汤高(0.6g)、中剂量组(0.3g)与5-Fu组均能抑制肿瘤生长,其中以高剂量组和5-Fu组效果最佳,扶正抑瘤汤低剂量组差异不明显(p>0.01);Tunel染色发现,与空白组比较,扶正抑瘤组和5-Fu组均可见到大量凋亡肿瘤细胞,其中以扶正抑瘤高、中剂量组诱导肿瘤细胞凋亡效果最佳,扶正抑瘤汤低剂量组和空白组比较则无明显差异;电镜结果显示:扶正抑瘤组和5-Fu组均可见到自噬小体增多,随着药物浓度降低自噬小体减少,之间呈正相关,其中以高剂量组效果最佳,空白组未发现自噬小体;Western-blot检测结果显示:与空白组比较,扶正抑瘤组和5-Fu组均可使自噬相关蛋白Beclin1、Bnip3及LC3表达上调,且与药物的浓度呈相关性,其中以扶正抑瘤高剂量组效果最佳。结论:扶正抑瘤汤对人肝癌HepG2和Hu-7裸鼠移植瘤细胞均具有抑制肿瘤细胞生长,诱导肿瘤细胞凋亡的作用,并且可激活肝癌HepG2和Hu-7细胞Beclin1、Bnip3及LC3蛋白的表达,从而诱导肿瘤细胞发生自噬,其中以药物高剂量组效果最佳。说明扶正抑瘤汤通过激活自噬是其发挥抗肿瘤的效应的机制之一。
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