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自2010年4月鸭坦布苏病毒病在中国首次被发现以来,该病迅速在中国沿海地区广泛传播,给养殖产业造成了巨大的经济损失。本研究通过构建融合性鸭坦布苏病毒E基因和鸭白介素2基因的重组腺病毒质粒,为鸭坦布苏病毒病的重组腺病毒疫苗的开发奠定基础。（1）重组腺病毒rADV-E-IL-2和rADV-E的构建及鉴定。用RT-PCR方法分别将1353bp的鸭坦布苏病毒E基因和鸭350bp的白介素2基因串联构成1733bp的融合片段克隆到腺病毒穿梭载体中,构建出重组腺病毒穿梭质粒pshuttle-E-IL-2,同时构建病毒E基因质粒pshuttle-E作为对照,分别与骨架载体共转染进HEK293细胞,经PCR和免疫印迹鉴定获得重组腺病毒rADV-E-IL-2和rADV-E。病毒可在HEK293细胞中连续传代20代以上,具有基因组稳定性。纯化后检测rADV-E-IL-2滴度达到4.0×1010PFU/mL,rADV-E滴度达到6.0×1010PFU/mL。（2）重组腺病毒对雏鸭的免疫保护试验。将80只1日龄雏鸭随机均分为五组（rADV-E-IL-2组、rADV-E组、rADV-N组、WF100组和PBS组）,分别用重组腺病毒rADV-E-IL-2、重组腺病毒rADV-E、空载的重组腺病毒rADV-N、商品化鸭坦布苏弱毒疫苗WF100株和PBS于雏鸭7日龄和21日龄进行皮下注射。结果显示,rADV-E-IL-2组和rADV-E组可诱导产生抗鸭坦布苏病毒的特异性IgG,rADV-E-IL-2组抗体水平在首免后35d达到最高峰1.39,和其余组相比差异性显著（P<0.05）。rADV-E-IL-2组和rADV-E组均具有中和病毒能力,rADV-E-IL-2组和rADV-E组中和抗体效价在首免后35d达到最高峰,rADV-E-IL-2组为1:55,rADV-E组为1:44。rADV-E-IL-2组和rADV-E组均能显著提高外周淋巴细胞的增殖,增殖指数分别为3.13和2.69,与rADV-N组、PBS组相比差异性显著（P<0.05）。rADV-E-IL-2组和rADV-E组血清中细胞因子IL-2含量（94.78pg/mL、76.18pg/mL）、IL-6含量（66.43pg/mL、59.45 pg/mL）和IFN-γ含量（201.51pg/mL、128.61pg/mL）与rADV-N组、PBS组相比差异性显著（P<0.05）。在攻毒保护试验中,rADV-E-IL-2组和rADV-E组雏鸭未发生临床症状,剖检脾脏无病变。rADV-E-IL-2组检测脾脏内鸭坦布苏病毒拷贝数为101.22copies/μL,rADV-E为101.81copies/μL,两者与rADV-N组、PBS组相比差异性显著（P<0.05）。