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1.成人眼IPE与RPE细胞体外分离、培养与鉴定目的:体外分离培养成人眼IPE与RPE细胞,观察其形态、结构及生长情况.方法:以酶辅助显微分离-酶消化法分离IPE细胞并培养,以酶消化法分离RPE细胞并培养,倒置相差显微镜观察原代与传代细胞生长情况,描记生长曲线,以鼠抗人角蛋白抗体对培养的IPE与RPE细胞进行免疫学鉴定,透射电镜观察细胞超微结构.结果:体外成功培养出IPE与RPE细胞,两者角蛋白抗体染色均为阳性.原代细胞均含色素颗粒,随传代次数增加色素逐渐减少甚至消失.细胞伸展后均呈多角形或梭性,传代细胞伸展更加明显.两种细胞生长曲线接近.透射电镜显示均具有正常细胞器结构.结论:利用酶辅助显微分离-酶消化法与酶消化法分别获得了大量高纯度的成人眼IPE与RPE细胞,两者在体外培养条件下形态、结构以及生长情况相似,为进一步研究两者功能提供了实验基础.2.PEDF、VEGF在成人眼IPE与RPE细胞表达测定目的:测定并比较PEDF与VEGF在成人眼IPE与RPE细胞中表达情况.方法:利用Trizol一步法提取生长近融合传二代IPE与RPE细胞总RNA,对其PEDF、VEGF mRNA表达进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测,同时以酶联免疫吸附实验(ELISA)测定两种培养细胞上清液中PEDF含量.结果:体外培养的成人眼IPE与RPE细胞均表达PEDF和VEGF mRNA,IPE细胞的PEDF和VEGF mRNA含量均低于RPE细胞,IPE细胞上清液中PEDF含量也明显低于RPE细胞上清液.差异有统计学意义(P<0.01).结论:IPE和RPE细胞均可表达PEDF与VEGF.IPE细胞PEDF在mRNA表达及蛋白分泌水平上均低于RPE细胞,其VEGF mRNA表达水平也比RPE细胞低,提示两种细胞表达细胞因子功能上存在差异.