细胞壁靶向抗生素一般都具有杀菌作用,这与蛋白质合成抑制因子抑菌效果不同。因此,细菌杀伤作用常常伴随着肽聚糖生物合成的抑制及细胞裂解。然而，细菌并没因此保持着对细胞壁靶向抗生素的敏感性,伴随着细菌适应性进化,耐药性发生已成为普遍现象。1950年末,由于产生β-内酰胺酶而对青霉素耐受的金黄色葡萄球菌己广泛出现。1960年初,临床开始引入β-内酰胺酶耐受的苯唑西林,二十年后,苯唑西林耐受金黄色葡萄球菌成为医院获得性感染中常见病原菌,并且MRSA对许多不同类型抗生素都具有耐受性。1997年,万古霉素中度耐受金黄色葡萄球菌被首次发现,随后在美国又发现了万古霉素完全耐受金黄色葡萄球菌。这些耐药菌的发现暗示着广谱耐药性金黄色葡萄球菌存在的可能性。本文主要对万古霉素中度耐受的分子机制进行探究,希望能为新型药物靶标的发现提供理论基础。点突变常常会导致临床菌株的抗生素耐受,然而耐药性发生的分子机制目前仍不清楚。我们利用抗生素筛选获得了万古霉素中度耐受金黄色葡萄球菌,并通过全基因组测序鉴定该菌株的遗传变化,发现二元信号组分WalK (G223D)发生了点突变。我们用walK (G223D)替换野生型MW2中正常walK,发现单点突变的菌株细胞壁代谢相关基因表达下调、自溶活性减弱、细胞壁增厚以及万古霉素敏感性减弱。磷酸化分析实验表明WalK (G223D)自磷酸化能力减弱,进而导致WalR磷酸化水平降低。另外,凝胶迁移实验显示被WalK(G223D)磷酸化的WalR结合atlA启动子能力减弱。综上所述,walK点突变导致WalK(G223D)自磷酸化能力减弱,从而降低了WalR磷酸化水平,低磷酸化WalR结合atlA启动子能力减弱,进而导致atlA表达下调。低水平的atlA表达使得细胞壁代谢速度减慢,因此细菌表现出细胞壁增厚、自溶减弱及万古霉素敏感性减弱。