细胞凋亡是细胞清除由于自身或外界环境不良环境影响产生的不良细胞的主要途径之一。体外培养的卵母细胞易受一些环境及外源刺激,如氧化剂,机械刺激,重金属,生物类的毒素,紫外线等产生一系列的刺激性反应,包括细胞转导路径,基因的表达和蛋白的合成,细胞的分裂增殖及凋亡,甚至是坏死;金属硫蛋白对细胞有抗氧化清除自由基的功效,对细胞的凋亡起抑制作用。由于环境的影响,细胞会不可避免的受到外界不良环境的影响,所以通过体外培养卵母细胞,外源性的添加应激诱导的因素从而进一步探讨其对卵母细胞发育和凋亡的影响,从而可以趋利避害,提高卵母细胞的成熟率,有利于体外受精,提高早期胚胎的发育率和附植率,降低不孕不育的比率或胚胎畸变率及流产率。本研究以牛卵母细胞为试验材料,应用共聚焦显微镜、Annexin V-FITC/PI双染试验、Fluo3/AM和RH123染色、RT-PCR的方法,初步研究CdCl₂、紫外线及H₂O₂对卵母细胞体外成熟及凋亡的影响及构建金属硫蛋白基因的过表达载体得出以下结论:1.本实验首次研究CdCl₂对牛卵母细胞体外成熟及凋亡的影响。实验表明,CdCl₂对卵母细胞的毒性作用呈剂量效应,随着其浓度的增加,卵母细胞凋亡加剧,在CdCl₂浓度达到1.6μg/ml和2.4μg/ml的时候,与对照组相比卵母细胞的凋亡率,成熟率都有明显的差异（P<0.05）;随着CdCl₂剂量的升高,其Ca2+荧光强度及线粒体膜电位的荧光强度增强,Bcl-2/Bax的比值发生较为明显的变化。2.本实验首次研究紫外线对牛卵母细胞体外成熟及凋亡的影响。实验表明,紫外线对卵母细胞的作用呈时间效应,随着其照射的增加,卵母细胞凋亡加剧,在照射时间达到20min和30min的时候,与对照组相比卵母细胞的凋亡率,成熟率都有明显的差异（P<0.05）;随着照射时间的延长,其Ca2+荧光强度及线粒体膜电位的荧光强度增强,Bcl-2/Bax的比值发生较为明显的变化。3.本实验首次研究H₂O₂对牛卵母细胞体外成熟及凋亡的影响。实验表明,H₂O₂对卵母细胞的凋亡的影响呈剂量依赖效应。当H₂O₂的浓度达到300μmol/L和400μmol/L时,与对照组,100μmol/L和200μmol/L处理组相比,卵母细胞的凋亡率有明显的差异。随着浓度的增加,Ca2+荧光强度、线粒体膜电位的荧光强度及Bcl-2/Bax的比值都会发生较为明显的变化。4.本实验初步构建了金属硫蛋白基因的过表达载体,为后续的转染实验及MT基因的表达的检测做进一步的准备。