研究背景经支气管冷冻肺活检(Transbronchial cryobiopsy,TBCB)是一种新的肺活检方法,现有的研究表明在间质性肺疾病、肺移植排斥反应监测以及肺外周病灶、支气管腔内的恶性肿瘤的诊断中,TBCB与传统的经支气管肺活检相比具有组织标本更大、对组织的破坏更小,具有更高的诊断率和较好的安全性。虽然TBCB的相关研究不断增多应用范围越来越广,但作为一项临床新技术仍有较多的问题尚未明确,如最佳的冷冻肺活检的时间、不同的冷冻时间是否对标本大小和质量有不同的影响等。目的:本研究拟通过动物体内实验的方式,探讨冷冻时间与冷冻肺活检标本大小的关系;评价不同冷冻时间对组织标本质量以及并发症发生率的影响;评价不同冷冻时间对活检组织细胞形态的影响差异,为TBCB的临床应用提供参考。方法:对3只全麻下气管插管的成年比格犬进行TBCB术,根据不同的冷冻时间3-8秒进行分组,共分为6组,每个冷冻时间获取标本6-10块,评价冷冻活检标本大小与冷冻时间关系。记录并发症(气胸及出血)发生情况,评价冷冻时间与并发症发生率的关系。对活检标本进行组织病理学评价,通过观察活检组织标本是否含有终末细支气管、小动脉及肺泡组织评价标本质量。通过对活检标本组织是否存在细胞肿胀、细胞变形、细胞收缩、核固缩等指标的观察,评价不同冷冻时间对冷冻活检标本组织细胞形态的影响差异。结果:本实验一共进行44次冷冻肺活检,分别在三只比格犬中进行了 14次、17次以及13次冷冻肺活检。根据不同的冷冻时间分组,3s组至8s组的冷冻肺活检标本平均大小范围从(12.2±2.2)mm2到(32.9±4.0)mm2不等,不同冷冻时间组间标本大小差异具有显著性(F=2.569,p=0.043),标本大小与冷冻时间呈正相关(r=0.850,p<0.001)。大部分冷冻肺活检仅发生0级或1级出血(75%,33/44)。未出现内镜下无法控制的严重出血,无引起血流动力学及呼吸功能的不稳定甚至导致动物死亡的3级出血。但在冷冻时间3秒、5秒、6秒、7秒、8秒均出现2级出血(25%,11/44)。在冷冻时间5秒、6秒以及8秒各出现1次气胸。所有冷冻活检标本均含有肺实质组织,且大部分组织结构完整,97.7%(43/44)的标本中可以观察到小动脉,97.7%(43/44)的标本中可以观察到终末细支气管,100%(44/44)的标本中可以观察到肺泡组织,标本中均未观察到组织的损坏。冷冻时间大于4s时均可以获得质量好的标本,当冷冻时间为4s时,并发症发生率相对较少。标本中均未观察到压力性损坏。所有冷冻活检标本均无细胞肿胀,少部分标本可以观察到极少量细胞存在细胞变形、细胞收缩及核固缩的细胞形态改变,且发生几率很低,不同的冷冻时间对冷冻肺活检标本在细胞肿胀、细胞变形、细胞收缩及核固缩等细胞形态方面的影响均无明显差别。结论:TBCB标本大小与冷冻时间大小呈正相关,冷冻时间越长、标本越大。冷冻时间为3-8秒均可获得质量较好的标本,不同冷冻时间对标本组织细胞形态无明显影响,当冷冻时间为4s时,获得的标本质量较好,且并发症相对较少,建议可以作为冷冻肺活检时初始的冷冻时间。