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狂犬病是由狂犬病病毒（Rabies virus,RABV）感染引起的以侵犯中枢神经系统为主的致死性人畜共患传染病。RABV可以感染人及所有温血动物,引起狂犬病,一旦发病致死率几乎可达100%。本研究利用反向遗传操作,通过将绿色荧光蛋白（GFP）基因克隆到狂犬病病毒载体的N和P基因之间,并且在Vero E6细胞上进行重组病毒拯救,成功的拯救出携带GFP基因的重组狂犬病病毒rSAD-GFP,并对重组病毒的生物学特性进行了研究。通过测定病毒滴度,绘制生长曲线,病毒滴度测定结果表明重组病毒与亲本病毒在Vero E6细胞的生长特性基本一致,两种病毒生长没有显著性差异;重组病毒在Vero细胞连续传代数代,未发现外源基因丢失的现象。将拯救的重组病毒rSAD-GFP通过脑内注射的方法感染BALB/C小鼠,通过该试验评价重组病毒的致病性,小鼠在重组病毒攻击后,无可见的临床症状和死亡现象,表明拯救的重组病毒属于弱毒毒株。在构建rSAD-GFP毒株成功的基础上,我们利用该质粒,构建含有矿化基因W6的重组质粒,并对外源矿化基因的插入位置进行了一系列的研究,获得了不同的重组质粒,转染Vero E6细胞,但是未能拯救成功。该矿化基因插入位置对病毒的拯救存在影响,而狂犬病毒含有囊膜,也是拯救过程中的一个障碍,并且有研究发现连续的天冬氨酸（D）或谷氨酸（E）存在导致的强负电荷性多肽插入困难,这种情况下病毒也很难拯救成功。介孔纳米二氧化硅是一种外表有很多像蜂巢孔一样的小孔,中间却是空心的,类似蜂巢状的结构使得二氧化硅颗粒可以通过氢键、离子键作用、静电作用、疏水作用力与蛋白质结合,介孔二氧化硅可以负载病毒抗原,保护病毒抗原。本研究试图将介孔纳米二氧化硅作为体外矿化候选佐剂,将重组狂犬病病毒rSAD-GFP灭活抗原与介孔纳米二氧化硅按一定的比例混合,研究介孔二氧化硅作为疫苗佐剂对重组狂犬病疫苗的理化性质的影响,并通过M-ABT（抗原含量测定方法）检测疫苗中糖蛋白含量变化。利用BALB/C小鼠模型进一步评价重组病毒灭活抗原的免疫效价和以介孔纳米二氧化硅为佐剂的疫苗免疫特性。ELISA法检测血清抗RABV G蛋白IgG抗体,RFFIT检测血清中和抗体。同时,取21和28日龄的小鼠脾脏用于ELISPOT以分析IL-4和IFN-γ的分泌水平;在28天用30个LD50的CVS对小鼠进行脑内攻毒,评价疫苗保护效力,结果显示介孔纳米二氧化硅佐剂可以有效诱导细胞免疫和体液免疫。攻毒保护试验结果显示单纯的抗原保护率可以达到70%,与佐剂混合的抗原保护率可以达到100%。介孔纳米SiO2作为体外矿化及免疫佐剂的研究,为狂犬病新型疫苗的研究奠定基础。