第一部分颞叶癫痫的遗传易感性研究　　 癫痫是一种最常见的中枢神经系统疾病，由脑部神经元的异常放电引起。其中作为临床上药物难治性的颞叶癫痫是成人局灶性癫痫中最常见的一种，属于多基因遗传病。它的发生和发展受到遗传因素和环境因素共同作用的影响。基因水平的变异可以通过影响癫痫发作的易感性、临床表型以及对药物的反应来影响疾病的发展和预后的治疗。目前通过候选基因关联研究筛查出的易感基因研究结果不尽一致。星形胶质细胞是神经系统胶质细胞中数量最多体积最大的一类细胞，可通过调节离子的平衡、神经递质水平等影响癫痫的发生。本文通过候选基因研究策略，以在星形胶质细胞中高表达的Kir4.1、AQP4和EAAT1基因为候选基因，分析其多态性与颞叶癫痫的相关性。　　 研究方法：　　 以中国汉族人群TLE患者和非癫痫对照受试者为研究对象，采用病例对照研究策略，应用TaqMan法检测Kir4.1、AQP4和EAAT1基因的常见SNPs位点，分析这些SNPs位点及所构成的单倍型与颞叶癫痫的相关性，并进一步探讨基因型-表型的关系。　　 研究结果：　　 1.Kit4.1基因多态性与TLE的相关性　　 在438例TLE患者和695例非癫痫对照受试者中，检测Kit4.1基因的5个SNPs位点(rs12729701，rs3795339，rs3120973，rs2486253，rs1053074)，并未发现两组间其基因型分布和等位基因频率存在显著性差异，单倍型分析并结合临床表型的分层分析未见显著性的差异。　　 2.AQP4基因多态性与TLE的相关性　　 在438例TLE患者和695例非癫痫对照受试者中，检测AQP4基因的7个SNPs位点(rs162008, rs162006, rs2075575, rs455671, rs16942851, rs1058424, rs335929)，并未发现两组间其基因型分布和等位基因频率存在显著性的差异，单倍型分析并结合临床表型的分层分析未见显著性的差异。　　 3.EAAT1基因多态性与TLE的相关性　　 在447例TLE患者和718例非癫痫对照受试者中，检测EAAT1基因的3个标签SNPs位点(rs1864213，rs2301067，rs1020239)，发现rs1030239-G等位基因在TLE组的频率显著高于对照组(83.8％ vs.79.2％，P=0.0067，OR=1.35，95％CI=1.08-1.69)，EAAT1的3个SNPs位点组成的单倍型A-T-G在病例组中的分布频率显著高于对照组(43,7％ vs.37.6％, P=0.012, OR=1.27,95％CI=1.05-1.52)。　　 研究结论：　　 本研究提示EAAT1基因可能是中国汉族人群TLE的易感基因，而Kit4.1和AQP4基因与TLE之间不存在相关性。　　 第二部分发作性运动源性手足舞蹈徐动症致病基因的筛查及突变体的功能研究　　 发作性运动源性手足舞蹈徐动症(paroxysmal kinesigenic choreoathetosis，PKC)是一种罕见的发作性神经系统疾病，其临床表现为突然的动作诱发，具有反复发作的肌张力障碍、舞蹈手足徐动等不自主运动。本研究利用新一代测序技术(next-generation sequencing，NGS)筛查并鉴定出PKC的致病基因为富含脯氨酸跨膜蛋白2基因(proline-rich transmembrane protein2，PRRT2)。突触体相关蛋白25kDa(synaptosomal-associated protein25kDa SNAP25)为SNARE蛋白家族的一员，参与突触囊泡与突触前膜锚定及融合调控通路。有研究指出PRRT2可通过与SNAP25相结合来发挥作用。结合国内外研究发现PRRT2膜内区存在有四种错义突变，可能会影响PRRI2与SNAP25的结合。　　 研究方法：　　 应用Sanger测序法筛查PKC散发患者中PRRT2的突变;利用定点突变技术扩增包含突变位点的4个PRRT2序列(c.841T＞C，c.859G＞A，c.922C＞T, c.950G＞A);构建含目的片段的表达载体;利用免疫共沉淀技术研究PRRT2与SNAP25间的相互作用。　　 研究结果：　　 Sanger法测序在29例散发患者中发现10例携带PRRT2基因的突变，其中6例为c.649dupC突变，共计3种错义突变，分别为c.841T＞c，c.859G＞A，c.922C＞T。得到含野生或突变PRRT2序列的表达载体。错义突变的PRRT2与SNAP25的作用同野生型PRRT2相比有减弱的趋势。　　 研究结论：　　 PRRT2基因杂合突变可引起PKC的发生;突变型PRRT2与SNAP25的相互作用减弱。