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山药细菌性叶斑病是山药上发现的一种新病害,关于此病害的研究尚未见任何报道。本研究根据山药病株的发病情况和镜鉴试验,初步确定为细菌性病害。 从感病山药叶片中分离出四株培养性状不同的细菌菌株:YLS-1、YLS-2、YLS-3、YLS-4。在适宜条件下回接山药,只有菌株YLS-2能引起山药发病,发病症状与原病叶症状一致,并且可以从接菌发病的山药叶中再分离出该细菌,表面性状与原来分离的纯培养细菌一致,符合柯赫氏法则,证明细菌分离物YLS-2为山药叶斑病的病原菌。 以三种标准菌株2584(Curtobacterium flaccumfaciens pv.flaccumfaciens)、T30(Cur.f.pv.beticila)和ICMP3023(Pseudomonas syringae pv.syringae)做形态学观察和生理生化实验,结果表明细菌分离物YLS-2和T30及2584亲缘关系较接,推测它们是近缘种。 利用168 rDNA通用引物,以YLS-2的全序列基因组为模板进行PCR扩增,得到长度约为1.5kbp的特异性条带,将该条带切胶、回收、克隆并送交测序,得到长度为1485bp基因序列,将该序列递交GenBank进行Blast同源序列检索,在亲缘关系相近的前39个序列中,前35个均为短小杆菌属的菌株。用DNAStar软件进行系统进化分析,系统发育树图显示山药叶斑病菌与甜菜银叶病菌(Curtobacterium flaccumfaciens pv.basellae(登录号:AY273210))单独构成一个分支,其同源性高达98.7%,这就说明山药细菌性叶斑病菌是萎蔫短小杆菌的一个变种。 本研究利用ITS(Internal Transcribed Spacers)的通用引物以YLS-2的全序列基因组为模板进行PCR扩增,将所得特异性条带切胶、回收、克隆并送交测序,得到长度为501bp基因序列,将该ITS序列递交GenBank进行Blast同源序列检索,在亲缘关系相近的前9个序列中,前8个均为短小杆菌属的菌株,另外一个序列不是菌株的序列。其中萎蔫短小杆菌甜菜致病变种(Curtobacterium flaccumfaciens pv.betae)与YLS-2有84.9%同源性。用DNAStar软件进行系统进化分析,系统发育树图显示该系统树中YLS-2萎蔫短小杆菌的另外三个变种成为一枝,这表明YLS-2是萎蔫短小杆菌的一个新的致病变种。 综合山药斑点落叶病菌的形态学观察和生理生化试验,16SrDNA的序列分析和ITS的序列分析结果表明,此病菌是萎蔫短小杆菌的一个新的新的致病变种。初步命名为(Curtobacterium flaccumfaciens pv.dioscorea)。