均相法检测小而密低密度脂蛋白浓度的研究

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小而密低密度脂蛋白(sd-LDL)是动脉粥样硬化发生、发展的重要标志物,监测血浆中sd-LDL的浓度对临床动脉粥样硬化性心血管疾病的诊治、病情判断具有重要意义。然而,目前检测血清sd-LDL浓度检测的方法均难以广泛应用于临床,故研发一种检测迅速、操作简便、精密度高且适用于临床的方法显得尤为迫切。据最新国外文献报道,一种能采用全自动生化仪直接测定sd-LDL浓度的均相法有望实现临床sd-LDL浓度监测的突破,其实施的关键是选择对特定脂蛋白组分有强解离度的表面活性剂。本文以表面活性剂与特定脂蛋白选择性解离作用的研究为切入点,对这种新型检测sd-LDL浓度的方法进行剖析。首先,利用超速离心法分离纯化血清中各组分脂蛋白,并优化了分离条件,得到分离各种亚型脂蛋白的最佳密度参数;同时提取了所需的高纯度各种亚型脂蛋白。其次,选用阳离子、阴离子、非离子等近百种商业表面活性剂,研究表面活性剂的结构特征与其对脂蛋白选择性解离作用之间的规律。结果发现:亲水亲油值(HLB值)在10-14之间的非离子表面活性剂对脂蛋白的解离作用较强;聚乙二醇类非离子表面活性剂EM701和JK-14对高密度脂蛋白有一定的选择性解离作用。然后,根据分析总结的规律,探索性地设计合成了近30种聚乙二醇类非离子表面活性剂,进而筛选出对特定脂蛋白选择性解离作用更好的表面活性剂。研究合成的表面活性剂对脂蛋白的选择性解离作用,结果显示:表面活性剂聚乙二醇3-苄氧基苯基醚对除sd-LDL外各组分脂蛋白(主要包括高密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和乳糜微粒)均有较高的解离度。最后,将表面活性剂聚乙二醇3-苄氧基苯基醚用于配制检测sd-LDL浓度的试剂盒,并分别对含有高、中、低浓度sd-LDL的血清样本进行检测,结果显示:该配制的试剂盒对含中浓度的sd-LDL血清样本检测结果较好,但是对于高、低浓度的血清样本检测结果尚存在一定误差,因此,还有待进一步的研究与探索。
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