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目的：研究一种新型的AAV重组病毒(rAAV8-hFVIII)治疗血友病A的治疗效果,并在病毒设计构建中引入定点整合概念,为血友病A的基因治疗提供方向。方法：动物实验方面,我们在本实验中引入两个种群的老鼠：携带人体AAVS1位点的转基因小鼠(AAV小鼠)和敲除FⅧ的基因小鼠(FVIII KO小鼠),将其分为高压注射组,正常注射组和溶剂空白对照组。目的基因表达方面,我们使用ELISA检测hFVIII蛋白1、7、14、21、35、60、90天抗原抗体表达情况；在100天时,杀死小鼠取其心、肝、脾、肺、肾,使用RT-PCR检测病毒转录情况。生理出凝血指标方面,我们采用活化部分凝血活酶时间检测法来观察30天时FVIII KO小鼠内源性凝血指标的变化,同时用小鼠断尾法检测小鼠生理出血时间的变化。AAVS1特异位点整合方面,我们在部分AAV小鼠上加入Rep共同高压注射,使用nested PCR检测接头序列,并在100天时对小鼠进行肝脏部分切除手术,使用Real-time PCR观察其表达变化。结果：FⅧ抗原检测结果显示,在使用相同给药方式的条件下,两种不同模型动物的蛋白表达相似,一般在病毒注射60天左右表达量就比较降的比较低(<1%),90天时接近基底。而高压注射和正常注射两种不同的注射方式则带来了不同的表达趋势,高压注射后模型在7天时间才能产生表达,随后表达较平稳；而以正常方式注射的动物在1天时就有一个很高的表达,但随后快速下降。RT-PCR结果显示,100天时,小鼠体内仅肝脏和脾脏仍有病毒转录,且很微弱。FVIII KO小鼠生理状况改变及APTT时间检测结果显示,使用病毒的小鼠其病理状态得到很大改善,出凝血时间较未使用病毒的FVIII KO小鼠有显著缩短,并且还能观察到1%的抗原表达能带来5%左右的酶活性。作为一个探索性研究,我们还在部分AAV小鼠上进行了rAAV8-hFVIII和Rep质粒的共注射,并运用Nested-PCR方法检测到有整合的发生。使用Q-PCR来观察整合是否带来表达效率的提升,我们发现在肝切前后,肝脏的FⅧ拷贝数有所下降。结论：最终的研究结果表明,rAAV8-hFⅧ在初期能达到一个较好的治疗效果,很好的改善了血友病A的病理状况,但表达时间较短,在三个月时已无表达。我们发现正常注射相比于高压注射更有利于病毒载体的表达。rAAV8-hFⅧ在Rep介导的定点整合系统下,整合至人体AAVS1位点,大大增加了病毒载体应用的安全性。