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目的:建立实验性变应性脑脊髓炎(Experimental allergic encephalomyelitis, EAE)小鼠模型,流式细胞仪检测实验组小鼠脾脏CD4+ T和CD4+CD25+ T细胞数量的变化,来研究CD4+ T细胞和CD4+CD25+ Treg细胞在EAE发病机制中的作用,为进一步研究其发病机制及治疗方法提供依据。方法:用髓鞘碱性蛋白(Myelin basic protein, MBP)加福氏完全佐剂制备抗原佐剂乳化物,分别于0d、7d免疫诱导BALB/c小鼠。模型组分高剂量组与低剂量组。高剂量组每只0.2ml抗原佐剂乳化物,含400μg MBP、百日咳疫苗(Bacilus pertusis vaccine,BPV)0.1ml;低剂量组每只0.2ml抗原佐剂乳化物,含200μg MBP、BPV 0.1ml;对照组PBS +CFA+BPV抗原佐剂乳化物0.3ml,正常组不作任何处理。观察和比较各免疫组小鼠的体重变化、发病临床表现并进行症状分级评分。在二次免疫后取症状明显的模型组、对照组及正常组小鼠的脑组织进行切片和HE染色。观察比较各免疫组小鼠的组织病理变化,分析不同剂量抗原诱导小鼠发病情况。无菌分离小鼠脾淋巴细胞,经非特异性抗原植物血凝素(PHA)刺激后,ELISA方法检测脾细胞培养上清中干扰素-γ(IFN-γ)的水平。ELISA方法检测自身抗体水平。取小鼠脾脏制备单个脾细胞悬液,分别加入10μl单克隆抗体,孵育后用流式细胞仪检测模型动物脾细胞中CD4+ T细胞和CD4+CD25+ T细胞数目。无菌取小鼠尾部血清,检测特异性自身抗体水平。结果:多数实验组小鼠出现EAE的临床症状。实验组小鼠最早于抗原诱导后第三天开始出现动作迟缓,尾部无力等症状。第二次免疫后逐渐出现进食减少,行动缓慢,弓背,后肢或前肢中度无力,跛行甚至后肢完全瘫痪等症状,发病严重者死亡。其中高剂量组小鼠有9只出现尾部无力(1级),3只出现后肢或前肢中度无力(2级),1只后肢严重无力,跛行(3级),3只死亡(5级),发病率为89%。低剂量组小鼠8只出现尾部无力(1级),2只出现后肢或前肢中度无力(2级),1只死亡(5级),发病率为61%。对照组小鼠没有发病。光镜下见实验组小鼠脑组织血管周围炎性细胞浸润,呈“袖套”样改变,脑组织疏松化,对照组小鼠脑组织未见明显病理改变。EAE组的IFN-γ的水平明显高于对照组(P<0.05)。CD4+ T细胞数目明显上升,CD4+CD25+ T细胞数目变化不明显。模型组抗体水平明显高于对照组(P<0.01)。结论:(1)本研究采用免疫诱导法所建立的BALB/c小鼠EAE动物模型在临床表现、病理变化等方面均符合EAE改变,模型稳定、可靠。(2)实验动物IFN-γ水平增高,可能是导致自身反应性Th1细胞升高的原因之一。CD4+ T细胞增殖,CD4+CD25+ Treg与CD4+ T细胞比值改变和CD4+CD25+ Treg细胞相对下降可能是EAE的致病机制之一。