【摘 要】
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背景:动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是冠状动脉粥样硬化性心脏病和缺血性脑卒中等心脑血管病的主要原因,深入研究AS的发病机制有积极的意义。AS是一种慢性炎症性疾病,本研究假设Pim-2能通过抑制炎症机制来逆转AS的发生发展,mTOR信号可能是其发挥AS抗炎作用的通路。目的:本研究通过体内、体外实验构建AS模型,明确AS条件下Pim-2、mTOR信号通路及相关炎症因子的表达。通过
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背景:动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是冠状动脉粥样硬化性心脏病和缺血性脑卒中等心脑血管病的主要原因,深入研究AS的发病机制有积极的意义。AS是一种慢性炎症性疾病,本研究假设Pim-2能通过抑制炎症机制来逆转AS的发生发展,mTOR信号可能是其发挥AS抗炎作用的通路。目的:本研究通过体内、体外实验构建AS模型,明确AS条件下Pim-2、mTOR信号通路及相关炎症因子的表达。通过过表达或敲减Pim-2,阐明Pim-2在AS炎症机制中的作用,并探讨Pim-2抗AS炎症机制是否与mTOR信号有关。方法:体外,THP-1细胞源性巨噬细胞用氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）处理构建泡沫细胞模型。用慢病毒构建Pim-2过表达和Pim-2敲除THP-1细胞株。油红O染色检测泡沫细胞吞噬脂滴情况,试剂盒检测细胞总胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）的含量;Western Blot法检测细胞Pim-2、mTOR、4EBP1、S6K1及其磷酸化水平。RT-PCR法检测细胞IL-6、MCP-1、TNF-α、TLR4m RNA水平。体内,通过Apo E-/-小鼠尾静脉注射腺相关病毒（AAV）2/8构建Pim-2过表达和Pim-2敲减Apo E-/-小鼠。高脂饮食喂养Apo E-/-小鼠12周,建立AS模型。称重并检测空腹血糖、血脂水平;油红O染色检测主动脉纵切面与横切面斑块情况,计算斑块面积;Mac-2免疫组化检测主动脉斑块巨噬细胞浸润情况;Western Blot法检测主动脉根部Pim-2、mTOR、4EBP1、S6K1及其磷酸化水平;ELISA法检测血清CRP、IL-6、TNF-α水平;RT-PCR法检测主动脉根部IL-6、MCP-1、TNF-α、TLR4 m RNA水平。结果:（1）Western Blot分析,Pim-2、p-mTOR（Ser2448）、p-S6K1（Thr389）、p-4EBP1（Thr37/46）在泡沫细胞和高脂诱导的Apo E-/-小鼠中均表达上调。（2）体外实验,过表达Pim-2可减少泡沫细胞内脂滴沉积,减少炎症因子IL-6、MCP-1、TLR4、TNF-α的m RNA表达水平和细胞内TC、FC、CE的含量。体内实验,Pim-2过表达小鼠相较于阴性对照组,主动脉斑块减少,巨噬细胞聚集减少,主动脉根部IL-6、TNF-α、TLR4、MCP-1 m RNA表达和血清内CRP、IL-6、TNF-α水平均下降;Western Blot法分析Pim-2过表达后,p-mTOR、p-S6K1、p-4EBP1去磷酸化。（3）敲减Pim-2在体内实验和体外实验则得到相反的结果。结论:Pim-2具有抗AS炎症作用,可能与mTOR信号通路的去磷酸化有关,提示Pim-2可能是AS的治疗靶点。
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