【摘 要】
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从人胎盘中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增出巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)胞外区的,具有人全部配基结合活性区域的前三个免疫球样蛋白结构域(D1-3)cDNA〔Wang et al,Mo
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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从人胎盘中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增出巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)胞外区的,具有人全部配基结合活性区域的前三个免疫球样蛋白结构域(D1-3)cDNA〔Wang et al,Mol Cell Biol,13∶5348-59,1993〕,经平端连接将其克隆到原核表达体pET-28a的His-Tag下游,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,D1-3在罕主菌中获得高效表达,表达量约蛋白的46%.用酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbentassay,EIA)和Scatchard分析证明了D1-3有明显的M-CSF专一结合活性,kd值为7.8nM,只有一个M-CSF结合位点.在此基础上,进一步扩增、克隆并在大肠杆菌中表达了重组蛋白D2-3和D3.这样的结果与大肠杆菌的表达产物的结合特性一致,为上述的配基结合区的模型又提供了证据.M-CSF与DI-Ⅲ二聚体的存在.定点突变研究证明,第四个Ig样结构的突变,在无配基存在的情况下,受体能发生激活,从而导致细胞转化〔Carlberg et al,Mol Cell BIol,7∶2778-87,1994〕.据此研究人员推测驱动受体二聚化的结构域不在M-CSFR胞外区的前三个Ig样结构域,而闰于第四个Ig样结构域.
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