MIRNA-218通过Survivin在胆管癌发病机制中的作用研究

来源 :广州医学院 广州医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:feiwu111
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目的:本实验旨在研究 miRNA-218 在胆管癌中的表达,并且探讨miRNA-218调控的靶基因Survivin,在细胞系中研究其对于胆管癌细胞的相关生物学行为的影响,验证两者连接关系。从而在该角度上研究胆管癌发病机制,为胆管癌的早期诊断及治疗提供新的方向。  方法:  培养两种胆管癌细胞系(CCLP1 和 QBC939)和非肿瘤胆管细胞系(H69),采用real-time PCR检测miRNA-218表达水平,并比较其在胆管癌细胞系与非肿瘤胆管细胞系中的差异。将 miRNA-218minics 及阴性对照转染CCLP1和QBC939细胞,设立miRNA-218组、阴性对照组及空白对照组,分别利用细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况,采用 BD Martigel 基底膜基质胶侵袭室测定其侵袭性。将CCLP1和QBC939细胞分别共转染miRNA-218 mimic和pMIR-Survivin,miRNA-218 mimic和pMIR-Survivin-mut。检测荧光素酶活性,确定miRNA-218与Survivin的相关性。  结果:  在胆管癌细胞系(CCLP1和QBC939)中的表达显著低于非肿瘤胆管细胞系(H69)(P<0.01)。miRNA-218 组较阴性对照组及空白对照组细胞凋亡率显著增加,P<0.05。说明miRNA-218在胆管癌的发生发展中起负性调节作用。与阴性对照组和NC组相比,转染miRNA-218 mimics处理能显著抑制胆管癌细胞的侵袭能力,有统计学意义 P<0.01。荧光素酶活性检测结果显示野生型的 3’端非编码区的报告基因载体的荧光素酶活性与其阴性对照组及空白对照组相比显著下降,有统计学意义 P<0.05,突变型的 3’非编码区的报告基因载体荧光素酶活性与其阴性对照组及空白对照组相比未见显著变化,无统计学意义P>0.05。  结论:  1.miRNA-218在胆管癌中的表达降低,并能增加胆管癌细胞的凋亡,抑制胆管癌细胞的侵袭,在胆管癌的发生发展中起负性调节作用。  2.miRNA-218可直接与Survivin3UTR相互作用,miRNA218对于胆管癌的负性调节作用很有可能是直接通过Survivin发挥作用。
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