壳聚糖与丙烯腈接枝共聚后所得的产物壳聚糖—g—丙烯腈，不溶于水，透气性好且无毒，是一种颇有广阔应用前景的固定化酶载体，可应用于固定化木瓜蛋白酶、果胶酶、胰蛋白酶等。由于固定化酶的独特优越性，对于啤酒、果酒等的除浊有一定的效果。壳聚糖与丙烯腈的接枝共聚，虽有研究报道，但其工艺条件尚存在有待研究改进的地方：而将壳聚糖—g—丙烯腈用于固定化酶及其应用于啤酒的澄清，目前还未见文献报道。本文研究内容图解如下：本文研究取得了以下结果： 1、引发剂体系的筛选：分别以接枝率（G％）、接枝效率（E％）、酶固定率（％）三个因素作为考察指标，对H₂O₂—NH₂OH·HCl，K₂S₂O₈—NaHSO₃和Cu²⁺—壳聚 糖－－－。O。H种引发剂体系进行了筛选，权衡得失、利弊，最后得出 K。S。O厂刊aHSO； 为最优的引发剂体系。用该引发剂体系引发壳聚糖与丙烯睛接枝共聚反应，不仅 接枝率（％）、接枝效串（％）、酶固定率（％）高，重现性好，而且后处理简便， 价格较Ce4”引发剂便宜。用KAOmpSO3作为壳聚糖与丙烯睛接枝共聚反应的 弓泼剂，目前还末见文献报道。 2、采用七因素六水平（Ue）的均匀设计实验法，分别以接枝效率（％）和酶固定率 （％）作为壳聚糖与丙烯睛接枝共聚反应的优化工艺条件的考核指标，筛选出了该 反应的最优工艺条件：（）、以 E％为考核指标的最优工艺条件：壳聚糖浓度（w／w） 3．35％，AN／chi＝7，ChUK。S。O。一6，NaHSO。IKS。Os＝0．538（三个比值为物质的量 之比，下同），反应时间3．sh，反应温度40’C，乙酸浓度为2％。（2）、以酶固 定宰（％）为考核指标的最优工艺条件：壳聚糖浓度（w／w）1．45％，AN／chi＝10．5， Chil。S。O。一 6，NaHSO。M。S。Os＝0．538，反应时间3．sh，反应温度40’C，乙酸 浓度为5％。在最优工艺条件下，实验结果分别为：（l）G％：195二9％，E％： 92二4％，酶固定率（％）：74．63％；（）G％：200．79％，E％：79．19％，酶固 定率（％）：80．83％。与郑良华等人的报道相比，不仅 G％、E％增大，而且反应 时间缩短了1．sh，反应温度降低了20℃。显然该工艺条件可以节约能耗，降低成 本。将均匀设计法应用于壳聚糖的接枝共聚研究，目前还未见文献报道。 3、分别用IR、SEM、X一衍射、DTA、DTG等现代物理方法，比较系统地表征了壳 聚糖一g一丙烯睛的结构c 4、应用h（‘）正交实验法，研究了壳聚糖一g一丙烯睛固定木瓜蛋白酶的工艺条件， 得出其最佳工艺条件：PH值为 8，吸附时间为 12h，离子强度为（C。。川刀5 mol·L“’， 酶量为 50mg／g载体这，与单因素实验所得结果相一致。在此条件下制得的固定化 酶的活性最高，蛋白质分解率为62．53％，如此高的活性目前还未见文献报道。 5、研究了固定化木瓜蛋白酶的性质，研究表明：固定化酶的最适PH为8，比游离酶 的最适 PH（7）高一个单位；固定化酶的最适温度为 65℃，比游离酶（65℃）高 st；固定化酶的热稳定性较游离酶好，最适温度下的半衰期为 22．45 h约为游离 酶门0．47h）的2倍：在70℃连续加热9 h后，固定化酶的活力保持在91％，而游 离酶的活力只有61％；米氏常数（KIn）的测定表明，固定化酶的I｛In约为游离酶的 KIn的1／4，这说明固定化酶对底物的亲活力大大增加c以上固定化酶的最适PH、 温度以及热稳定性、半衰期、n等表明，壳聚糖一g一丙烯睛是一种优良的固定化 酶载体，目前还未见相关文献报道。 6、研究了环境条件对固定化木瓜蛋白酶活性的影响，在15’C和30’C下分别对固定化 酶不同保存条件进行了研究，同时以游离酶作为对照，研究结果表明，固定化酶、 游离酶在密封、避光的条件下保存效果最好，而温度（15C，30’C）的影响并不 明显。在此条件下，固定化酶的半衰期为36天，而游离酶的半衰期则为25天。 因此，固定化酶比游离酶易于保存。 7、初步应用研究表明：固定化酶对于啤酒的低温浑浊有一定的澄清作用c用固定化 酶处理的啤酒浊度有所下降；冷藏（4’C）70天后无冷浑浊现象发生，色略淡但保 持了啤酒原有的风味。