基于金磁微粒标记技术的可目视化蛋白质芯片检测方法的建立及应用

来源 :西北大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yyagan
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
蛋白质芯片也叫蛋白质微阵列,是将大量蛋白质分子按预先设置的排列固定于特定的载体表面,根据蛋白质分子间的特异性结合原理,对靶分子实现高通量、高灵敏度、微型化检测,在蛋白质组的功能研究、疾病诊断以及药物开发中显示了巨大的潜力。目前,蛋白质芯片的检测方法主要有荧光标记和免疫金-银染色法,其中以胶体金作为蛋白标记物结合银增强染色法应用于蛋白质芯片检测,灵敏度高,并可目视化判读结果。但是胶体金标记蛋白质的过程复杂、繁琐,标记的蛋白质不能定量。本研究用金磁微粒(GoldMag particles)作为一种新的蛋白标记技术,结合银增强染色方法建立可目视化蛋白质芯片的检测体系。金磁微粒是Fe3O4包被金颗粒后形成的纳米级磁性复合微粒,除具有超顺磁性、磁响应性、悬浮稳定性等特点外,还具有胶体金的特性。金磁微粒标记技术方法简便,操作简单,标记效率高,标记的蛋白质可定量。本文首先以人IgG和羊抗人IgG为模式蛋白,将人IgG固定于环氧基修饰的玻片上制备蛋白质芯片,通过封闭、与金标羊抗人IgG孵育,结果经银染显色进行信号放大,产生可目视化的黑色点阵。通过优化条件,建立了可目视化蛋白质芯片检测体系,确定了以下最佳实验条件:(1)选择GPTS玻片作为本实验的载体。(2)最佳点样浓度为0.1-0.2mg/mL。(3)点样后玻片固定蛋白的条件为37℃,1-2h。(4)抗原抗体的反应时间为30min。(5)以1%BSA作为封闭剂。(6)银染显色时间为10-15min。按照优化后的条件,将该方法应用于HCV抗体的检测,分析了该体系的检测限和特异性,检测了经ELISA验证的10例健康人血清和6例HCV阳性血清。结果表明:该体系简便、快捷、特异性强,阴性和阳性检测结果与ELISA相符。通过比较金磁微粒和胶体金标记技术在可目视化蛋白质芯片检测方法中的优劣,结果表明,胶体金检测方法灵敏度高,但是非特异性强,容易产生假阳性结果;金磁微粒的粒径较大,金密度小,银染作用不强。但是金磁微粒非特异性吸附弱,假阳性率低,而且金磁微粒标记蛋白质的过程简单,标记的蛋白可以定量,随着金磁微粒制备技术的发展,其在可目视化蛋白质芯片检测中具有巨大的应用潜力,并可推动蛋白质芯片技术尽快应用于临床检验。
其他文献
今天,老师把数学试卷发下来了,大家拿着试卷互相比分数。
对宁波女子自由式摔跤14名重点队员损伤的特点,进行了调查和分析。结果表明,女子自由式摔跤损伤部位多发生于膝关节、肘关节、指关节、耳部、肩关节和腰背等,对易损伤部位、
今天早上,刮了一阵风,风把所有的大人都吹走了。世界上没有了大人,孩子们全都躲在家里睡懒觉、玩电脑,可逍遥了。但是,没过几天就出现了一堆问题。例如,没有人指挥交通,没有人煮饭,没
河东区人大常委会坚持把“忠实于党、立足于法、着眼于民、致力于创”作为加强自身建设的基本要求,着力加强思想建设、作风建设、能力建设,进一步增强常委会组成人员、机关工作
<正>查尔斯·泰勒的鸿篇巨制《世俗时代》,自2007年出版以来,提供了对西方人身份和文化发展的深刻洞见。就研究西方思想而言,这是近十年来最重要的一本书。这篇评论将关注本
会议
新课标提出了知识和能力、过程和方法以及情感态度价值观三个维度的目标,其中,情感态度和价值观目标的实现主要取决于和谐课堂的构建, 而和谐课堂构建的关键在于教师素养的提
一个人用30年时间,无怨无悔地付出全部精力与热情,坚定执着地带领老百姓奔小康。他就是市第十六届人大代表,东丽区连续八届人大代表,金桥街流芳台村党总支书记许会芳。熟悉他的人
通过详细调查,全面掌握县内古树名木分布及生长状况,根据古树名木生存现状,有针对性提出保护管理措施,以期达到科学保护的目的。
在海河的下游,有一个大型现代化钢铁民营企业,像一艘巨轮,破浪前进,它就是享誉津门的天津荣程联合钢铁集团有限公司。巨轮的船长,就是天津市人大代表、天津荣程联合钢铁集团有限公
<正>背景资料:突眼是甲亢Grave病在眼部的特殊表现,其中浸润性突眼约占5%~10%,其发病与自身免疫紊乱相关,缺乏特异、有效的治疗方法。大剂量糖皮质激素冲击治疗具有强大的抗炎
会议