粒毛盘菌多糖结构、邻苯二甲酰化修饰及生物活性研究

来源 :合肥工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:street_litter
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本文研究了粒毛盘菌YM262胞外多糖的分离纯化、结构表征、体外抗氧化活性及体外保湿活性,并对此胞外多糖进行了邻苯二甲酰化修饰,评价其修饰前后的免疫调节活性及其可能存在的作用机制。粒毛盘菌YM262发酵液经醇沉、脱色及脱蛋白后获得胞外粗多糖(LEP),再经DEAE-cellulose 52和Sepharose CL-6B柱色谱分离纯化,得到单一组分LEP-2a。高效凝胶渗透色谱(HPGPC)检测LEP-2a为均一多糖,分子量为1.52×105Da。 GC-MS结果表明LEP-2a由甘露糖和半乳糖组成,摩尔比为20.6:1.0。甲基化分析、高碘酸氧化、Smith降解、FT-IR和NMR (1HNMR、 13CNMR、 COSY、 TCOSY、 HSQC和HMBC)光谱结果表明LEP-2a的主链由→2)α-D-Manp-(1→ →3)-α-D-Manp-(1→、→2,6)-α-D-Manp-(1→和→3)-β-D-Galp-(1→组成,支链连接到主链中→2,6)--α-D-Manp-(1→的O-6位置。体外抗氧化实验结果表明LEP-2a对超氧阴离子自由基、羟基自由基和DPPH自由基具有显著地清除作用。体外吸湿与保湿活性实验结果表明LEP-2a具有良好的吸湿和保湿活性。粒毛盘菌胞外多糖(LEP-2a)经化学修饰获得邻苯二甲酰化多糖PHEP-2a,其取代度(DS)为0.251。紫外、红外光谱和核磁共振氢谱分析表明邻苯二甲酰化多糖被成功修饰。邻苯二甲酰化修饰后,多糖的元素(碳、氢、氮、硫)含量和热特性都发生了改变。免疫调节活性实验结果表明LEP-2a及其衍生物显著增加模型小鼠的体重、器官指数、吞噬指数和半数溶血值,提高模型小鼠的脾细胞增殖,促进血清细胞因子(白细胞介素-2和肿瘤坏死因子-a)的产生,提高酸性磷酸酶和乳酸脱氢酶的活性。同时发现,LEP-2a及其衍生物也提高模型小鼠超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性,降低丙二醛的含量;与同剂量的LEP-2a相比,PHEP-2a表现出更高的免疫调节活性,表明邻苯二甲酰化修饰可以增强该多糖的免疫调节活性。
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