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断开相互作用蛋白2同源A蛋白(DIP2A)是由Dip2a编码的进化上比较保守的一种蛋白,属于DIP2蛋白家族。体外研究表明,DIP2A在小鼠胚胎神经系统选择性表达,且有可能作为卵泡抑素样蛋白(FSTL1)的受体介导其在心脑血管方面的保护作用。尽管如此,对内源DIP2A的生理学功能还不十分清楚。因此,我们的目的是利用CRISPR/Cas9系统进行原核注射制作Dip2a-LacZ报告基因小鼠模型,以研究Dip2a在成鼠神经系统的表达模式和生理学功能。本研究具体的打靶策略是利用pX330-sgRNA质粒造成基因组中Dip2a第一个外显子中ATG起始密码子之前的两个碱基处的双链断裂,随后Dip2a-LacZknock in DONOR质粒通过其两侧的同源臂将LacZ-NEO片段整合到该位点。于是,Dip2a的启动子便可驱动LacZ基因的表达,同时也保证了 Dip2a的完全灭活。在此,我们通过PCR其左臂、右臂及LacZ片段验证了 LacZ-NEO片段的正确整合。RT-PCR、蛋白质印迹结果在RNA水平和蛋白表达水平上均证实了通过基因打靶实现了 Dip2a基因失活。RT-PCR、LacZ染色、实时荧光定量PCR结果显示LacZ表达谱与内源性Dip2a的表达模式一致。由此我们成功建立了Dip2为-LacZ报告基因小鼠模型。在出生的子代小鼠中,LacZ阳性小鼠(Founder)所占比例为11.1%(2/18),并且其转基因可传递。经观察分析,Dip2a敲除小鼠并不胚胎致死,且也无明显发育缺陷。LacZ染色结果表明,Dip2a在成鼠神经系统包括小脑绒球(浦肯野细胞层、颗粒细胞层)、海马体(齿状回颗粒层、海马锥体层)、脊髓、视网膜(外核层、内核层和神经节细胞层)处有较高水平的表达。本研究通过向小鼠受精卵直接显微共注射环状质粒DNA,实现了约5.3kb的大片段的LacZ报告基因的敲入,成功构建了Dip2a-LacZ报告基因小鼠模型,为后续在整体动物水平研究DiP2a生物学功能提供了模型工具。并希望我们描述的Dip2a在神经系统的表达分布及对其潜在功能的分析能为以后研究Dip2a在神经系统的功能提供一定的理论基础。