论文部分内容阅读
第一部分:载IR780靶向VEGFR2纳米粒的制备及基本性质的检测目的制备一种新型载IR780靶向VEGFR2纳米粒。检测纳米粒的基本性质,IR780的包封率以及与VEGFR2抗体的连接率。方法以PLGA作为载体,采用超声乳化法制备包载IR780的非靶向荧光纳米粒:(IR780/PLGA);运用碳二亚胺法将VEGFR2抗体与(IR780/PLGA)纳米粒相连接,最终制备出靶向荧光纳米粒:(VEGFR2/IR780/PLGA)。运用光学显微镜、激光共聚焦显微镜、扫描电子显微镜以及透射电子显微镜观察纳米粒的形态结构;马尔文粒径分析仪检测纳米粒粒径大小及表面电位;多功能酶标仪检测纳米粒的吸收光谱;高效液相色谱法检测纳米粒中IR780的包封率;激光共聚焦显微镜观察纳米粒与VEGFR2抗体的连接情况;流式细胞仪检测纳米粒与VEGFR2抗体的连接比率。结果成功制备出(VEGFR2/IR780/PLGA)纳米粒。光学显微镜及激光共聚焦显微镜观察纳米粒成点状,分散良好;扫描电子显微镜及透射电子显微镜观察纳米粒呈球形,结构稳定,大小均匀;马尔文粒径分析仪测得纳米粒平均粒径为(273.23±31.55)nm,平均电位为(-8.85±1.60)mV;多功能酶标仪检测纳米粒的吸收光谱,结果显示其在780nm处出现最大吸收峰,表明IR780已成功包载于PLGA中;高效液相色谱法绘制IR780的标准曲线回归方程,然后运用标准曲线方程计算出(VEGFR2/IR780/PLGA)纳米粒中IR780的含量。最后通过计算得出IR780的包封率为(87.37±2.44)%;激光共聚焦显微镜显示VEGFR2抗体已成功与纳米粒相连接;流式细胞仪检测纳米粒与VEGFR2抗体的连接率为(83.60±4.79)%。结论成功制备出(VEGFR2/IR780/PLGA)纳米粒,其外观呈球形,结构稳定,大小均匀,分散良好,IR780的包封率及纳米粒与VEGFR2抗体连接率均较高。为后续实验奠定了基础。第二部分:载IR780靶向VEGFR2纳米粒的体外荧光成像及光动力性能的检测目的检测(VEGFR2/IR780/PLGA)纳米粒的体外荧光成像能力以及体外光动力性能。方法用胎牛血清配置浓度为(62.5、125、250、375、500μg/m L)的(VEGFR2/IR780/PLGA)纳米粒,运用定量荧光和生物发光成像系统对纳米粒进行荧光成像,并通过系统软件测量其信号强度,分析荧光信号的强弱和纳米粒浓度之间的关系,评估其体外荧光成像能力;用双蒸水配置浓度为(62.5、125、187.5、250、375、500μg/m L)的(VEGFR2/IR780/PLGA)纳米粒,在808nm激光的激发下(激光能量参数:密度50J/cm2,功率600m W/cm2,时间83s),用单线氧荧光探针(SOSG)检测纳米粒的活性氧产量,并分析活性氧产量与和纳米粒浓度之间的关系,评估其体外光动力性能。结果体外荧光成像结果显示,随着(VEGFR2/IR780/PLGA)纳米粒浓度增加,荧光强度逐渐增强。荧光强度和纳米粒的浓度呈正性相关,表明(VEGFR2/IR780/PLGA)纳米粒具备优秀的荧光成像能力;SOSG检测结果显示,随着(VEGFR2/IR780/PLGA)纳米粒浓度的增加,SOSG荧光强度逐渐增强,及产生的活性氧逐渐增多。活性氧产量和纳米粒的浓度呈正性相关,证明纳米粒具备优秀的光动力性能。结论(VEGFR2/IR780/PLGA)纳米粒在体外具备优秀的荧光成像能力以及光动力性能。第三部分:载IR780靶向VEGFR2纳米粒体外寻靶及光动力诱导大鼠脉络膜血管内皮细胞凋亡的实验研究目的培养大鼠脉络膜血管内皮细胞(RCVECs),检测(VEGFR2/IR780/PLGA)纳米粒对RCVECs的毒性作用、寻靶能力以及光动力治疗(PDT)效果。方法培养RCVECs,用培养基配置浓度为(50、125、250、375、500μg/m L)的(VEGFR2/IR780/PLGA)纳米粒,采用CCK-8法检测纳米粒对RCVECs的毒性作用;将纳米粒分为靶向组、非靶向组、抗体封闭组及阴性组,用激光共聚焦显微镜与流式细胞仪检测纳米粒在体外对RCVECs的寻靶能力;将纳米粒分为靶向激光组,非靶向激光组,单纯激光组及阴性对照组,用流式细胞仪检测纳米粒介导的光动力诱导RCVECs的凋亡比例。结果成功培养RCVECs;CCK-8检测结果显示RCVECs存活率分别为(91.78±1.79)%、(91.37±1.23)%、(89.25±1.96)%、(88.89±2.04)%、(88.74±2.30)%,各组间差异无统计学意义(P>0.05),结果表明(VEGFR2/IR780/PLGA)纳米粒没有明显的细胞毒性;激光共聚焦显微镜显示在靶向组中RCVECs周围的纳米粒明显多于非靶向组和抗体封闭组;流式细胞仪检测靶向组纳米粒与细胞结合率为(58.13±1.64)%,明显高于非靶向组(20.64±1.89)%和抗体封闭组(15.12±1.16)%,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测靶向激光组诱导RCVECs凋亡的比例为(82.99±0.98)%,明显高于非靶向激光组(30.75±1.81)%和单纯激光组(7.05±0.96)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功培养RCVECs,(VEGFR2/IR780/PLGA)纳米粒对RCVECs没有明显细胞毒性,生物安全性高,在体外具备良好的靶向能力,同时拥有优秀的PDT效果。