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鳜是我国重要的水产养殖鱼类,对其免疫系统的研究在理论和应用方面都具有重要意义。本研究对鳜非特异性免疫因子白介素-8(IL-8)基因进行了克隆,并对已克隆的五个非特异性免疫因子白介素-1?(IL-1?)、IL-8、g 型溶菌酶(g-lysozyme)、viperin和恒定链(invariant chain)在大肠杆菌中进行表达。采用RACE-PCR 和简并引物扩增的方法克隆到鳜IL-8 基因的cDNA全长,其开放阅读框包含297 nt,编码99 个氨基酸。用染色体步移的方法获得它的DNA全长为1643 nt,含有4 个外显子和3 个内含子。对已经报道的鱼类IL-8 氨基酸进行相似性分析时发现,鳜IL-8 含有趋化因子CXC 亚族的4 个半胱氨酸特征结构,与已知的鱼类的IL-8一样,第一个半胱氨酸上游没有其它脊椎动物CXC 亚族特有的Glu-Leu-Arg (ELR)基序。根据鳜IL-1?、IL-8、g-lysozyme、viperin和invariant chain的开放阅读框设计含有酶切位点的表达引物,扩增片段和表达载体pET-32a 双酶切之后,连接,构建重组表达质粒,经测序无误后,将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)中,经IPTG 诱导表达。超声波裂解处理表达菌后,SDS-PAGE 分析表达产物,结果表明:IL-1?、IL-8、g-lysozyme、viperin和invariant chain 在大肠杆菌中获得了表达,表达产物分别为43 ku、25 ku、35 ku、55 ku和45 ku的融合蛋白,其中g-lysozyme 以可溶形式表达,其余四个基因都以包涵体形式表达。用Ni-NTA 亲和层析和切胶回收的方法对表达的蛋白进行了纯化。G-lysozyme 融合蛋白对溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)具有溶菌活性。制备了兔抗IL-1β、IL-8、viperin 和invariant chain的抗血清,经Western blotting 分析,目的基因IL-1β、IL-8、viperin 和invariant chain的表达产物能够被兔多克隆抗体特异性识别。从本试验结果可以推断:在大肠杆菌中表达的有生物活性的g-lysozyme 具有临床应用价值,为研究其在鱼类非特异性免疫中的潜在作用提供了可靠的依据;制备的兔抗鳜IL-1β、IL-8、viperin 和invariant chain多克隆抗体为在体外研究这些基因在组织中的分布奠定基础。