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肺癌是我国最常见、最普遍的癌症,发病率和死亡率都位于众多肿瘤的前列。目前治疗癌症的化疗药物多是西药成分,而其严重的毒副作用制约着西药的使用,因此现在越来越多的研究转移到中药有效成分,黄酮类是自然界中存在较广泛的生物活性物质,目前研究表明黄酮类化合物具有抗氧化、防止血管增生、抗炎、抗病毒、降血糖、降血脂、抗骨质疏松等药理作用。半枝莲、白花蛇舌草作为传统的解毒类中药,其主要活性成分有黄酮类和甾醇类等。而半枝莲、白花蛇舌草药对在LLC小鼠肺癌模型中抗肿瘤情况未见报道。首先采用正交设计法优选半枝莲、白花蛇舌草药对中黄酮类成分的提取工艺。以总黄酮含量作为指标,通过单因素与正交实验相结合的方法,以提取温度、提取时间、料液比、提取次数、乙醇体积分数为考察因素,选出半枝莲、白花蛇舌草的最佳提取工艺:提取温度80℃、提取次数2次、每次提取120min、料液比为1:20、乙醇体积分数70%,在此提取条件下提取率可以达到16.61%。然后对总黄酮提取液进行乙酸乙酯层萃取,黄酮含量为20.04%。其次,将LLC细胞悬液按0.2mL(细胞含量2×106个/mL)接种于C57BL/6小鼠的右腋皮下,建立小鼠肺癌模型,将小鼠按体重随机分为模型组、给药组,半枝莲、白花蛇舌草药对提取物以低、中、高剂量每日灌胃给药,测量小鼠肿瘤长、宽,计算肿瘤体积。结果表明半枝莲、白花蛇舌草乙酸乙酯层提取物能有效抑制小鼠体内肿瘤的生长,抑制率分别为:低剂量31.64%、中剂量32.76%、高剂量68.36%;阳性药组抑瘤率为84.18%。测定其肿瘤体积、脾指数、胸腺指数,结果表明提取物能减小肿瘤模型小鼠的瘤体积,增加小鼠脾指数、胸腺指数,说明半枝莲、白花蛇舌草提取物对小鼠机体的免疫力具有一定的提高作用。HE染色结果表明提取物对小鼠肿瘤组织具有破坏作用,使肿瘤细胞的细胞核碎裂,周围出现炎性浸润,细胞核缩小,且有大量细胞核碎裂。实验发现模型组小鼠毛发无光泽、活动受限,体重增加。给药组小鼠饮食饮水正常,瘤体积增长较模型组缓慢,皮毛相对光滑,体重有所增加。通过UPLC实验标识出野黄芩苷、槲皮素、柚皮素、木犀草素、芹菜素。通过MTT实验探讨半枝莲、白花蛇舌草乙酸乙酯层提取物中的野黄芩苷、木犀草素、芹菜素对LLC细胞的抑制作用。结果显示野黄芩苷20uM-200uM对LLC细胞有抑制作用且呈浓度依赖性,其中80-200uM有显著性差异,IC50值为184.5uM;木犀草素10-200uM对LLC细胞有抑制作用,且呈浓度依赖性,其中20-200uM具有抑制作用且呈浓度依赖性,IC50值为43.69uM。芹菜素10-200uM对LLC细胞有抑制作用,且呈浓度依赖性,其中50-200uM具有抑制作用且呈浓度依赖性,IC50值为76.95uM,其中20-200uM均有显著性差异。依据野黄芩苷、木犀草素、芹菜素等比例给药并检测其对LLC细胞的抑制作用,通过Western blot法检测到等比例给药作用于LLC细胞使MAP4K3蛋白表达降低、LC-3蛋白表达升高、P62蛋白表达降低,然后通过爬片检测自噬蛋白荧光情况,给药组的自噬荧光聚集明显较对照组强,阳性药雷帕霉素组也出现明显的自噬蛋白荧光聚集情况,表明野黄芩苷、木犀草素、芹菜素使LLC细胞死亡的方式可能是自噬。最后建立小鼠肺癌模型,将小鼠按体重随机分为模型组、野黄芩苷以低、中、高剂量每日灌胃给药,测量小鼠肿瘤长、宽,计算肿瘤体积。结果表明野黄芩苷能有效抑制小鼠体内肿瘤的生长,抑制率分别为:低剂量39.01%、中剂量50.62%、高剂量80.34%;阳性药组抑瘤率为84.18%。测定其肿瘤体积、脾指数、胸腺指数,结果表明野黄芩苷能减小肿瘤模型小鼠的瘤体积,增加小鼠脾指数、胸腺指数,说明野黄芩苷对小鼠机体的免疫力具有一定的提高作用。HE染色结果表明其对小鼠肿瘤组织具有破坏作用,使肿瘤细胞的细胞核碎裂,周围出现炎性浸润,细胞核缩小,且有大量细胞核碎裂。实验发现模型组小鼠毛发无光泽、活动受限,体重增加,野黄芩苷组小鼠饮食饮水正常,瘤体积增长较模型组缓慢,皮毛相对光滑,体重有所增加。