目的:通过细胞实验观察持续静压力作用下人牙周膜细胞（Human periodontal ligament cells,HPDLCs）表达骨保护素（Osteoprotegerin,OPG）、核因子-κB受体活化因子配体（Receptor activator of NF-κB ligand,RANKL）的增龄性变化,探讨正畸牙移动过程中年龄因素对压力侧骨改建的影响及其分子生物学机制。方法:1.收集因治疗需要拔除的健康离体牙,分离根中1/3的牙周膜,组织块法原代培养获得HPDLCs。通过苏木素-伊红染色（Hematoxylin-eosin staining solution,HE）观察细胞大小、形态,免疫细胞化学染色鉴定细胞来源。2.根据受试者年龄将所获得HPDLCs分为A组（13-18岁）、B组（19-29岁）、C组（30-44岁）,共三组。使用CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8）描绘细胞生长曲线以观察比较不同年龄组HPDLCs的增殖能力;β-半乳糖苷酶（senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-Gal）染色检测不同年龄组HPDLCs的衰老细胞比率。3.将A、B、C各组细胞均按加力时间进一步分为8小组,分别给予0,1.5,3,6,12,24,48,72小时持续静压力机械刺激,压力刺激去除后立即提取上清。每个小组均设有空白对照,与压力组加力同步计时,并提取上清。酶联免疫吸附测定法（Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA）检测上清液,并比较不同年龄组HPDLCs在持续静压力作用下OPG、RANKL的表达水平变化。结果:1.组织块法可成功培养出HPDLCs。培养3-15天后在倒置相差显微镜下可见不同年龄组组织块周围均有细胞爬出。三组细胞培养中,A组（13-18岁）细胞爬出时间为4±2天,B组（19-29岁）细胞爬出时间为7±2天,C组（30-44岁）细胞爬出时间为10±3天。A组、C组之间比较差异具有统计学意义（P＞0.05）,其余组间比较均无统计学意义（P＞0.05）。2.HE染色光镜下观察可见胞体为长梭形或星形。胞质嗜伊红,胞核嗜碱性,符合HPDLCs形态学特征;免疫细胞化学染色光镜下观察可见细胞角蛋白（Cytokeration,CK）染色阴性,波形丝蛋白（Vimentin,VIM）染色阳性,结合取材部位,判定所培养细胞为HPDLCs。3.CCK-8细胞计数检测:各组HPDLCs数量均随时间增长而增加。培养7天后A、B、C三组细胞增殖能力A组（13-18岁）＞B组（19-29岁）＞C组（30-44岁）,差异具有统计学意义（P＜0.01）。4.SA-β-Gal染色显示:染色阳性细胞比率随年龄增长而增加,衰老细胞染色阳性率为C组（7.2%±1%）＞B组（4.2%±0.5%）＞A组（2.1%±0.2）,三组两两比较均具有统计学意义（P＜0.05）。5.ELISA法检测蛋白表达结果显示:1)空白对照组相同时间点OPG蛋白表达量随年龄增长而增加（P＜0.01）,RANKL蛋白表达量随年龄增长而下降（P＜0.05）;2)压力组OPG、RANKL蛋白浓度均随加力时间延长而增加,相同时间点OPG蛋白表达水平随年龄增长而增加（P＜0.01）,RANKL蛋白表达水平随年龄增长而下降（P＜0.01）。OPG/RANKL蛋白比值随加力时间呈先下降后增加趋势,相同时间点OPG/RANKL比值随年龄增长而增加（P＜0.01）;3)压力组与空白对照组比较:OPG加力前后比较,A、B、C三组差异均具有统计学意义（P＜0.05）。RANKL加力前后比较,A、B、C三组差异具有统计学意义（P＜0.01）。OPG/RANKL比值加力前后比较,A、B、C三组差异具有统计学意义（其中A、B组P＜0.01,C组P＜0.05）;结论:1.组织块法可成功培养出HPDLCs。2.HPDLCs从组织块中爬出所需时间及衰老细胞比率随年龄增长而增加,增殖能力随年龄增长而下降。3.RANKL蛋白表达随加力时间增加而上升,相同时间点蛋白表达量随年龄增长而减少,表明持续静压力作用下增龄因素可下调RANKL蛋白表达。OPG蛋白表达随加力时间增加而上升,相同时间点蛋白表达量随年龄增长而增加,表明持续静压力作用下增龄因素可上调OPG蛋白表达。OPG/RANKL蛋白比值随加力时间呈先下降后增加趋势,相同时间点OPG/RANKL比值随年龄增长而增大,表明持续静压力作用下,增龄因素可上调OPG/RANKL比值,影响压力侧骨吸收,减慢成人正畸患者牙齿移动速度。