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目的:1、建立人牙周膜干细胞(hPDLSCs)重物静压力加载模型,探讨hPDLSCs体外培养的方法及力学加载方式;2、通过检测hPDLSCs受压后成骨相关标志物ALP、RUNX2和OCN表达的变化,探索静压力对hPDLSCs成骨分化的影响,进一步加深对正畸牙周组织改建内在机制的认识。方法:1、采用组织块培养法培养原代人牙周膜细胞(hPDLCs),通过有限稀释法分离提纯hPDLSCs,为后续实验提供实验细胞。2、通过形态学观察、细胞克隆形成实验、流式细胞术细胞表型鉴定、流式细胞术细胞周期分析、免疫荧光染色、成骨诱导实验和成脂诱导实验等方式对细胞来源进行鉴定。3、采用不同的静压力(1、2、3g/cm~#)对培养的hPDLSCs作用不同的时间(12、24、72h),并设立各力值各时间点的空白对照组,分别采用RT-qPCR法和Western blot检测ALP、RUNX2和OCN的mRNA和蛋白表达情况。结果:1、体外成功培养hPDLCs,并成功分离提纯hPDLSCs,取4-6代性状稳定的hPDLSCs用于后续实验。2、细胞克隆形成实验表明所培养的细胞具有较高的克隆形成率(18%);流式细胞术表型鉴定CD90(98.26%)、CD146(61.02%)、CD34(0.02%),显示所培养的细胞为间充质来源,具有干细胞特性;流式细胞术细胞周期显示G_%/G_&期占比93.87%,表明所培养的细胞具有慢周期性的特征;免疫荧光染色显示hPDLSCs抗波形丝蛋白阳性,抗角蛋白阴性,表明细胞为间充质来源,无外胚层的污染;成骨诱导21d后细胞内形成大量矿化结节,茜素红染色阳性;成脂诱导21d后细胞内有脂滴形成,油红O染色阳性。3、1g/cm~#静压力作用于hPDLSCs,12h时可使ALP、RUNX2的mRNA表达量上调,加力至24h时ALP、RUNX2和OCN的mRNA表达量开始下调并低于正常水平;1g/cm~#静压力加载12h时RUNX2蛋白表达上调显著,但随着加力时间延长,三者蛋白表达量逐渐降低且均低于未加力组水平。4、2g/cm~#静压力作用于hPDLSCs,ALP mRNA表达量可在24h内升高,12h时达到高峰,随后低于正常水平,RUNX2和OCN mRNA表达量在加力24h后均低于正常水平;三者蛋白表达水平总体趋势与mRNA一致。5、3g/cm~#静压力作用于hPDLSCs,仅ALP mRNA表达量在加力12h时升高,其余各组各时间点表达量均低于正常水平,并随加力时间的延长而下降;三者蛋白表达水平总体趋势与mRNA一致。结论:本实验成功分离培养了hPDLSCs,经细胞来源鉴定证实hPDLSCs具有干细胞特性。静压力加载12h时成骨相关标志物表达上调,表明静压力在早期可能对hPDLSCs成骨分化具有促进作用;而随着加载力值的不断增大和加力时间延长,静压力对hPDLSCs成骨分化则表现为抑制作用。