目的:通过慢病毒转染构建过表达CD40L基因THP-1白血病细胞株,并采取尾静脉注射法构建过表达CD40L基因的裸鼠M5白血病模型,探讨过表达CD40L基因对裸鼠骨髓细胞凋亡的影响。方法:1、裸鼠M5白血病模型的建立及鉴定:(1)将18只3-4周龄的雌性NOD/SCID小鼠,随机分为3组,每组6只,即对照组、模型A组、模型B组。接种前连续2 d给予每只小鼠腹腔注射环磷酰胺2 mg/(kg·d),于预处理后24 h内接种细胞。模型组分别经尾静脉接种对数生长期THP-1细胞悬液1×10~7/只(A组)、5×10~6/只(B组),对照组小鼠采用同样方法注射等剂量生理盐水;(2)观察小鼠一般情况,于预处理前、接种细胞后7、14、21和28 d及处死时检测血常规并计数外周血白细胞分类;(3)濒死前处死取材,组织切片病理检查;2、过表达CD40L基因对裸鼠M5白血病模型中骨髓细胞凋亡的影响:(1)通过慢病毒转染方式构建过表达CD40L-THP-1细胞株,用嘌呤霉素进行稳转细胞株筛选,流式细胞术检测其筛选后纯度,采用Q-PCR法验证是否过表达CD40L基因;(2)40只3-4周龄的雌性NOD/SCID小鼠随机分为5组,每组8只,即空白对照组(A组)、THP-1组(B组)、THP-1+空病毒组(C组)、过表达CD40L组(D组)及THP-1+DNR组(E组),建模前处理方式同前,对照组小鼠经尾静脉注射0.2ml生理盐水,其余4组小鼠经尾静脉接种对数生长期相应细胞悬液1×10~7/只;(3)濒死前处死取材,流式细胞术检测血液及骨髓中人源白血病细胞比例及骨髓凋亡情况。结果:(1)模型组分别于接种细胞第7d和10 d开始,出现竖毛、萎靡少动等现象,与对照组比较,模型A组、模型B组两组小鼠体重于接种细胞21 d后明显下降(P<0.01),建模28 d后模型组白细胞计数明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),其中以接种1×10~7/只的A组最为显著。病理组织切片提示,模型组脾脏均可见弥漫性白血病细胞浸润,免疫组化结果提示,白血病细胞抗人CD13结果阳性,证实模型建立成功;(2)GFP绿色荧光在空转组细胞及过表达CD40L基因组细胞中几乎以相同的效率表达,即慢病毒成功转染THP-1细胞且经嘌呤霉素筛选稳转株后其纯度>95%。Q-PCR结果表明:过表达CD40L-THP-1组细胞的CD40L基因表达量明显高于THP-1组和空转组,(P<0.05);(3)对照组小鼠骨髓凋亡率明显低于其余四组(P<0.05);THP-1+DNR组、过表达CD40L-THP-1组小鼠骨髓凋亡率明显高于THP-1组(P<0.05);THP-1+DNR组与过表达CD40L-THP-1组小鼠骨髓凋亡率无明显差异(P>0.05);THP-1组与THP-1+空病毒组小鼠骨髓凋亡率无明显差异(P>0.05)。结论:(1)NOD/SCID小鼠经腹腔注射CTX预处理后,每只小鼠尾静脉注射THP-1细胞1×10~7或5×10~6个均可成功构建急性髓系白血病动物模型,符合急性髓系白血病全身播散的生物学特点,高浓度成瘤更快。(2)过表达CD40L基因可促进小鼠骨髓细胞凋亡。