【摘 要】
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目的:体外培养小鼠MIN6细胞,并给予Ang(1-7)干预,利用免疫荧光技术在共聚焦显微镜下观察细胞表面因子MafA、Ngn3的表达情况,及FoxO1在细胞内表达位置的变化,从而探讨Ang(1-7)能否改善高糖诱导下的MIN6细胞去分化。方法:1.将小鼠MIN6细胞用按照一定比例配制的DMEN培养基接种于25ml培养瓶中,置于37℃、5%CO2浓度的细胞孵箱中进行培养。每24小时更换培养液1次,待
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目的:体外培养小鼠MIN6细胞,并给予Ang（1-7）干预,利用免疫荧光技术在共聚焦显微镜下观察细胞表面因子MafA、Ngn3的表达情况,及FoxO1在细胞内表达位置的变化,从而探讨Ang（1-7）能否改善高糖诱导下的MIN6细胞去分化。方法:1.将小鼠MIN6细胞用按照一定比例配制的DMEN培养基接种于25ml培养瓶中,置于37℃、5%CO2浓度的细胞孵箱中进行培养。每24小时更换培养液1次,待细胞生长至贴满瓶壁80%时进行传代培养,根据细胞生长状况,选取第3-4代细胞进行实验操作。2.将细胞随机分为四组,A组为正常对照无干预措施;B组加入提前配制的25mmol/L高糖溶液;C组加入25mmol/L高糖溶液+10-5mol/L的Ang（1-7）溶液,（先加入Ang（1-7）,30分钟后加入高糖溶液）;D组加入25mmol/L高糖溶液+10-5mol/L的Ang（1-7）+10-5mol/L的A-779溶液（先加入A-779,30分钟后加入Ang（1-7）,再过30分钟加高糖溶液）;相同条件下共同培养24小时。3.利用免疫荧光技术在共聚焦显微镜下观察各组细胞中MafA、Ngn3的表达情况;以及FoxO1在细胞内表达的位置。结果:在共聚焦显微镜下观察各组细胞,A组细胞表达MafA,不表达Ngn3,FoxO1位于细胞核;B组细胞表达MafA较A组明显减少,表达Ngn3,FoxO1胞质/胞核比例增加;C组细胞与B组比较,MafA表达增加,但不及A组,Ngn3表达减少,FoxO1胞质/胞核比例减少,差异具有统计学意义（P<0.05）;D组较C组相比,MafA表达减少,Ngn3表达增加,FoxO1胞质/胞核比例增加,差异有统计学意义（P<0.05）,于B组比较无统计学差异。结论:血管紧张素（1-7）能改善高糖诱导下MIN6细胞的去分化,以及减弱高糖诱导下FoxO1由细胞核向细胞质的移动。
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