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本文从中医经典古籍入手,对历代重要医籍有关痴呆的文献进行了整理研究,从病名沿革、病因病机和防治方药等方面梳理其学术发展脉络,并重点阐述了老年性痴呆与痰邪致病之间的关系,提出了“以肾虚为主的五脏虚衰是老年性痴呆发生的内在机理,痰邪致病是老年性痴呆发病的关键所在”的痴呆发病观,并由此提出了补肾填精,化痰开窍的痴呆治疗法则。同时论述了以治痰良方温胆汤为基础的温胆汤改良方补肾填精,益髓充脑,祛痰化浊,开窍益智的作用原理。研究内容: 本课题初步探讨在可溶性Aβ25-35片断诱导的NG108-15细胞建立的AD模型,运用脑脊液药理学的方法,观察温胆汤改良方含药脑脊液及含药血清对AD细胞模型凋亡及凋亡相关蛋白bc1-2、bax表达的影响。进一步分析温胆汤改良方对老年性痴呆的可能作用机理。 方法: 以预先“老化”处理的5μmol/L的Aβ25-35片断诱导NG108-15细胞建立AD细胞模趔,实验分空白组、模型组、空白脑脊液组、含药脑脊液组、空白血清组、含药血清组。以温胆汤改良方含药脑脊液和含药血清分别作用于各组NG108-15细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态及其生长状况并摄片:MTT法检测细胞活性:流式细胞术检测细胞凋亡:SABC免疫组化检测凋亡相关蛋白bc1-2、bax的表达。 结果: 1.对细胞形态的影响 细胞在无Ap25-35的空白组生长背景清晰,细胞增长良好。在AB蛋白片断神经毒性作用下,其余各组细胞生长背景不良,可见若干死亡细胞和细胞碎片漂浮,NG108-15细胞数目明显减少,多积聚成簇状,大部分神经元胞体缩小,胞浆较暗淡,有斑点,有较多细胞脱壁漂浮现象,有突起伸出的神经细胞明显减少。与空白组比较,其余各组有突起细胞比率减少(19<0.05):含药血清组和含药脑脊液组与模型组比较,细胞突起率均增加,其差异有显著性(p<0.05)。 2.对细胞活性的影响 MTT法检测细胞存活率,与空白组比较,模型组、空白血清组及空白脑脊液组OD值降低(0<0.05);含药血清组和含药脑脊液组OD值高于模型组(17<0.05);含药脑脊液组比较于含药血清组,其OD值有升高趋势,但无统计学意义(0>0.05)。 3.对细胞凋亡的影响 与空白组比较,有Aβ25-35作用的各组,其细胞凋亡率均升高,其中除含药脑脊液组外,其余各组有极显著性升高(p<0.01);与模型组比较,含药脑脊液和含药血清组细胞凋亡率均减少(p<0.01),且含药脑脊液组神经元凋亡率小于含药血清组(p<0.05)。 4.对凋亡相关基因Bc1-2、Bax蛋白表达的影响 与空白组比较,有Aβ25-35作用的各组Bc1-2表达下降,而Bax的表达升高(p<0.05);与模型组比较,各血清组和脑脊液组神经元Bc1-2阳性表达数无显著