核黄素—紫外线A胶原交联对角膜胶原纤维重塑及生物力学稳定性的影响

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目的以核黄素-紫外线A角膜胶原交联(corneal collagen cross-linking,CXL)术后兔眼角膜基质细胞和胶原纤维作为观察对象,通过了解CXL术后角膜基质细胞和胶原纤维的变化规律,探讨角膜胶原纤维重塑在CXL术后生物力学稳定性的作用;初步评价CXL治疗进展期圆锥角膜的安全性、有效性。方法1.健康新西兰白兔15只,随机分为3组,右眼行CXL手术,左眼为正常对照,分别于术后1d、7d、4w取兔眼角膜,行HE和a-SMA染色、TUNEL法检测细胞凋亡。2.对CXL术后角膜行苦味酸天狼星红染色和角膜应力-应变测量,记录CXL术后胶原蛋白成分的变化、最大载荷、最大应力和弹性模量。3.选择13例(22只眼)进展期圆锥角膜,接受CXL治疗,于术前和术后1月、3月、6月和12个月复查,检查指标包括视力、角膜地形图、角膜活体共焦镜和角膜内皮计数等。结果1.正常角膜基质主要为致密结缔组织,角膜基质细胞散在分布于其中。CXL术后1d,术区基质中仅偶见基质细胞,角膜上皮细胞和基质细胞均可见大量凋亡细胞。术后7d,角膜基质细胞水肿、数量减少,角膜基质细胞和上皮细胞凋亡数量均较术后1d减少。术后4w,角膜基本保持正常厚度,角膜基质细胞和上皮细胞凋亡数量显著减少。术后7d和4w,角膜基质见部分细胞a-SMA染色呈阳性。2.正常角膜基质可见分布均匀、以红色为主的I型胶原,其间可见少量纤细、绿色的Ⅲ型胶原;术后7d,Ⅲ型胶原纤维明显增多,且纤维明显变粗;术后4w,Ⅲ型胶原纤维显著增多粗大,与I型胶原间杂分布。CXL术后不同观察时期角膜的弹性模量均较正常对照组增加。CXL术后1d横向比纵向弹性模量增加的量有统计学差异。3.圆锥角膜患者接受CXL术后12个月裸眼视力和最佳矫正视力分别较术前提高0.115±0.158LogMAR单位和0.114±0.218LogMAR单位。术后12个月Kmax值和散光分别较术前降低1.893±3.713D和0.117±1.488D。角膜厚度术后1月时减少27.5±26.8μm,术后12个月时角膜厚度与术前相比无统计学显著性差异。术后角膜内皮、眼压、晶状体和眼底无明显变化。结论1.CXL术后兔眼角膜基质细胞主要通过凋亡途径明显减少,周围基质细胞通过增殖补充凋亡的基质细胞的丢失,新生基质细胞通过活化形成成肌纤维细胞参与到角膜基质的重塑。2.CXL术后角膜各型胶原比例、分布发生改变,提示角膜基质胶原纤维发生重塑,CXL可以长期增加角膜的生物力学强度,其效应的维持可能与胶原纤维的重塑有关。3.CXL可以阻止进展期圆锥角膜病变发展,在1年的随访期内可观察到视力和角膜地形图的指标的改善,CXL将是治疗进展期圆锥角膜一个安全有效的方法。
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