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蝎镇痛活性肽1(BmK AGP-SYPU1)是本课题组从中国东亚钳蝎蝎毒中分离纯化筛选得到的镇痛活性肽,用小鼠醋酸扭体法进行药理活性测定,结果表明BmKAGP-S YPU1对小鼠内脏痛有明显抑制作用。通过一级结构分析和3D同源模建,分析BmK AGP-SYPU1的结构与镇痛功能关系,预测镇痛功能区域可能存在于分子的正电区、负电区和Face A(疏水区)。Q8、Y5、Y10、Y42、R18、K62和H64等位点可能与镇痛功能有关。应用重叠延伸PCR和PCR进行定点突变,构建pSYPU-1b-Tag(His)-Mut Y5F、pSYP U-1b-Tag(His)-Mut Y5A、pSYPU-1b-Tag(His)-Mut Y5W、pSYPU-1b-Tag(His)-Mut Q8A、pS YPU-1b-Tag(His)-Mut Q8K、pSYPU-1b-Tag(His)-Mut Y10H、pSYPU-1b-Tag(His)-Mut R18K、pSYPU-1b-Tag(His)-Mut Y42F、pSYPU-1b-Tag(His)-Mut Y42S、pSYPU-1b-Tag(His)-Mut Y42T、pSYPU-1b-Tag(His)-Mut Y42G、pSYPU-1b-Tag(HiS)-Mut Y5WY42F、pSYPU-1b-Tag(H is)-Mut K62L、pSYPU-1b-Tag(His)-Mut H64K 和 pSYPU-1b-Tag(His)-Mut H64R 等 15 种表达载体。热转化大肠杆菌BL21并进行诱导表达,重组蛋白以可溶形式存在于菌体上清液中,实现重组蛋白的可溶性表达,通过金属离子螯合层析和阳离子交换层析对重组蛋白进行纯化,每升发酵液可获得1～2mg电泳纯重组蛋白。用小鼠醋酸扭体法验证15种突变体的镇痛活性,结果显示BmK AGP-SYPU1 Y5、Y10、R18和Y42四个位点对镇痛活性有显著影响。镇痛功能区域存在于分子的正电区、负电区和疏水区。BmK AGP-SYPU1的第5位以及第42位氨基酸残基与镇痛活性密切相关。第5位和第42位氨基酸残基间的相互作用以及第5位氨基酸残基与β-turn3主链相互作用,从而影响β-tum3的偏移。β-tum3位置影响镇痛活性。β-tum3向分子内侧偏移,其镇痛活性上调;反之,β-turn3向分子外侧偏移,其镇痛活性下调。