论文部分内容阅读
第一部分ATRA诱导Sp100蛋白的表达及其对白血病NB4细胞增殖的影响目的:探讨Sp100在全反式维甲酸(ATRA)处理NB4细胞过程中的表达及其对NB4细胞增殖和周期的影响。方法:1μM的ATRA处理NB4细胞后,Q-PCR检测Sp100 m RNA的表达,Western blot检测Sp100蛋白的表达,间接免疫荧光(IF)检测Sp100定位的变化;采用慢病毒RNA干扰的方法干扰Sp100的表达后,观察Sp100-sh RNA对NB4细胞增殖和周期的影响,Western blot检测Sp100蛋白表达,CCK-8检测NB4细胞的增殖,流式细胞术(FCM)检测NB4细胞的周期。结果:ATRA能明显促进NB4细胞中Sp100 m RNA水平和蛋白水平的表达,并将Sp100由弥散的小点状转变为较大的斑块状;成功构建Sp100基因RNA干扰的稳定细胞株,感染Sp100-sh RNA的NB4细胞增殖活力明显高于未感染组和病毒空载组,并使G2/M期的细胞增多。结论:ATRA促进NB4细胞中Sp100的表达,Sp100可能参与NB4细胞增殖活力的调节。第二部分LG268对NB4细胞增殖和凋亡的影响目的:研究LG268对NB4细胞增殖和凋亡的影响。方法:LG268作用NB4细胞24 h或48 h,CCK-8实验和细胞集落形成实验检测细胞的增殖;FCM检测NB4细胞的凋亡和周期;Western blot检测Survivin、PARP、c-Myc,、cyclin D1、ERK、p-ERK、p38 MAPK和p-p38 MAPK蛋白的表达情况。结果:LG268以剂量依赖的方式抑制NB4细胞的增殖,以时间依赖的方式促进NB4细胞的凋亡;LG268可明显降低细胞的集落形成能力,将NB4细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期;此外,LG268能够下调Survivin、c-Myc和cyclin D1蛋白的表达,并使PARP的活化增多;LG268促进p38 MAPK的磷酸化而下调ERK的磷酸化。结论:LG268可抑制NB4细胞的增殖,促进其凋亡。